1、检样稀释：以无菌操作，将检样 25 g(或 25 mL)剪碎放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(内置适量玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体样品在加入稀释液后，最好置均质器中以8 000 r/min～10 000 r/min的速度处理1min，做成1:10的均匀稀释液。根据国家或当地卫生标准要求及对样品污染程度的估计，连续做几个10倍递增稀释，并选择3个连续的稀释度，用于接种乳糖胆盐发酵管。

2、乳糖发酵试验：接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。选择3个稀释度，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵管，置于36±1℃ 培养48±2h，观察是否产气。不产气的管报告为大肠菌群阴性。

3、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18～24h，观察菌落形态。

典型的大肠菌群菌落呈紫黑色并带有金属光泽或无光泽，而红色、粉红色菌落检出率较低。

4、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色镜检。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气、镜检为革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌者，即可报告为大肠菌群阳性。

5、报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN表，报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。根据试验的阳性管数计算出样品中大肠菌群的含量，报告出每100mL(g)大肠菌群的最可能数。

具体操作参见GB4789.3-2010《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》。