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实验——酸乳中乳酸菌的测定



录入时间:2011-4-12 13:08:35 来源:天津农学院精品课程

1 目的
1.1 了解酸乳中乳酸菌分离原理
1.2 学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
2 原理
    活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例,有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
    由于乳酸菌对营养有复杂的要求,生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等,一般的肉汤培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出率,关键是选用特定良好的培养基。采用稀释平板菌落计数法,检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
3 材料
3.1培养基
    MRS培养基,改良CHALMERS培养基,M17培养基。
3.2 仪器和器具
    无菌移液管(25ml,1ml),无菌水(225ml带玻璃珠三角瓶,9ml试管),无菌培养皿,旋涡均匀器。
    恒温培养箱。
4 流程
酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数
5 方法
5.1 样品稀释
    先将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中,在旋涡均匀器上充分振摇,务必使样品均匀分散,即为10-1的样品稀释液,然后根据对样品含菌量的估计,将样品稀释至适当的稀释度。
5.2 制平板
    选用2~3个适合的稀释度,培养皿贴上相应的标签,分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内,每个稀释度作2个重复。然后用溶化冷却至46℃左右的MRS或改良CHALMERS培养基倒平皿,迅速转动平皿使之混合均匀,冷却成平板。
5.3 培养和计数
    将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48h,观察长出的细小菌落,计菌落数目,按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
6 结果
6.1 指示剂显色反应
    乳酸菌的菌落很小,1~3mm,园形隆起,表面光滑或稍粗糙,呈乳白色、灰白色或暗黄色。由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈,酸碱指示剂呈酸性显色反应。
6.2 镜检形态
    必要时,可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状,成单杆、或双杆菌或长丝状。嗜热链球菌,呈球状,成对、或短链、或长链状。
6.3 参照比较
    据介绍,改良CHALMERS培养基的检出率较MRS培养基高,M17培养基较适合于乳球菌的培养,在检测时可同时使用多个培养基作比较。
7 思考
1 为什么乳酸菌的检测关键是选用特定良好的培养基?
2 培养基中为什么要加CaCO3

 

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