原理:有些细菌能分解含硫氨基酸,产生硫化氢(H2S),H2S会使培养基中的醋酸铅或氯化铁形成黑色的硫化铅或硫化铁。
方法1:醋酸铅琼脂法
培养基:
肉汤琼脂 100ml
10%硫代硫酸钠溶液(新配) 2.5ml
10%醋酸铅溶液 3ml
三种成份分别高压灭菌,前二者混合后待凉至60℃,加入醋酸铅溶液,混合均匀,无菌分装试管达5~6cm高,立即浸入冷水中,使冷凝成琼脂高层。
方法:用接种针蘸取纯培养物,沿管壁作穿刺,孵育于37℃ 1~2天后观察,必要时可延长5~7天。培养基变黑色者为阳性。
或将细菌培养于肉汤、肝浸汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面,在试管的棉花塞下方挂一约6.5×0.6cm2的浸蘸饱和醋酸铅溶液(10g醋酸铅溶于50毫升沸蒸馏水中即成)且已干燥的滤纸条,于37℃培养,观察7天,纸条变黑者为阳性结果。
方法2:三氯化铁明胶培养基法
培养基:
硫胨(Thiopeptone) 25g
明胶 120g
牛肉膏 7.5g
氯化钠 5g
蒸馏水加至 1000ml
上述成份灭菌后趁热加入5ml灭菌的10%氯化铁溶液。立即以无菌操作分装试管,达5~6cm高,迅速冷凝成高层。
方法:穿刺接种,培养于37℃观察7天,培养基变黑色者为阳性。
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