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细菌生化试验——吲哚试验



录入时间:2008-9-12 9:26:51 来源:青岛海博

   原理:细菌分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对位二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚。

培养基:邓亨氏蛋白胨溶液
试剂:常用下述两种。
1.欧立希氏(Ebrlich′s)吲哚试剂
对位二甲基氨基苯甲醛(P-dimethyl aminobenzaldehyde)   1g
纯乙醇                                              95ml          
浓盐酸                                              20ml
先以乙醇溶解试剂,后加盐酸,要避光保存。
2.Kovacs试剂
对位二甲基氨基苯甲醛                                5g    
戊醇(聚异戊醇)                                    75g
浓盐酸                                              25ml

方法:以接种环接种待试细菌的新鲜斜面培养物于邓亨氏蛋白胨溶液中, 37℃培养24~48小时后(可延长4~5天)。于培养液中加入戊醇或二甲苯2~3ml,摇匀,静置片刻后,沿试管壁加入试剂2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液体变红色者为阳性反应。

      也可将一指头大的脱脂棉,滴上两滴欧立希氏试剂,再在同处加滴两滴高硫酸钾(K2S2O4)饱和水溶液,置于含培养液的被检试管中,离液面约半寸,置烧杯内水浴煮沸为止,脱脂棉上出现红色为阳性。此法略繁,但省试剂且准确,因为将试剂加到液体中,吲哚和粪臭素均呈阳性,而用此法,只是吲哚(它能挥发)呈阳性反应。

      亦可以滤纸片浸湿1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%浓HCl溶液,然后以接种环刮取一环琼脂的纯培养物涂布于该滤纸上。

      细菌涂印周围呈蓝色者为阳性,细菌涂印周围无色泽变化或淡黄色者为阴性。

厌氧菌用蛋白胨水
蛋白胨                  20g   
葡萄糖                  10g   
硫乙醇酸钠               1g  
Na2HPO4(无水)         2g
琼脂                     1g
蒸馏水                  1000ml
加热溶解,调整pH至7.4~7.6,过滤,分装小试管,15磅高压15分钟。

 

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