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一株不典型金黄色葡萄球菌的分离鉴定



录入时间:2011-3-31 14:12:46 来源:医源世界

 

20059月,本中心接到报告,有2例因吃蛋糕引起的以呕吐、腹痛、腹泻 主要症状的患者,我们立即 往采样,并在2例患者吃剩的蛋糕中检出 株不典型的金黄色葡萄球菌,现将分离鉴定的过程报告如下

    1  材料与方法

    1.1  材料  检验材料为患者吃剩的蛋糕。

    1.2  方法

    1.2.1  实验仪器和试剂  实验仪器:恒温培养箱、梅里埃ATB  Expression 细菌鉴定仪及VIDAS免疫诊断分析系统,试剂:甘露醇高盐琼脂购自广东环凯微生物科技公司,血平板(使用人血)、卵黄琼脂平板、1mol/L的盐酸、3%H2O2为本单位自制,生化鉴定用的ID32 STAPH细菌鉴定卡及VIDAS葡萄球菌肠毒素试剂盒为法国梅里埃公司生产,其余均购自北京陆桥技术责任有限公司,试剂均在有效期内使用。

    1.2.2  检验方法  GB/T4789.10—2003《食品卫生微生物检验》[1],DNA酶测定按《微生物学和微生物学检验》[2]中的方法,细菌鉴定卡、葡萄球菌肠毒素的检测按法国梅里埃试剂使用说明书操作。

    2  结果

    2.1  增菌及分离  剩余蛋糕经7.5NaCl肉汤增菌后,同时接 于血平板、甘露醇高盐琼脂平板上,37培养24h后,取出观察菌落形态,在血平板上见白色、不透明、圆形、光滑、突起、周围有透明溶血圈、直径约1mm的小菌落;在甘露醇高盐琼脂平板上见黄色、圆形、光滑、突起、直径约1mm的优势菌落。挑起以上两种形态的单 菌落各3个做革兰染色镜检,均为革兰阳性球菌、部分呈葡萄状排列,同时接种于营养琼脂平板和双糖管上,置37、24h做纯培养。取纯培养物划线接种Baird-Parker平板及卵黄琼脂平板上,置37、24h培养,在Baird-Parker平板呈圆形、光滑、突起、黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈,且直径约为0.71mm。在卵黄琼脂平板上呈圆形、光滑、突起、原始区的菌苔呈淡黄色、单个菌落呈白色、直径约为11.3mm、其周围可见浑浊带和透明圈。

    2.2  生化试验  取营养琼脂平板上的纯培养菌落做下列生化试验:氧化酶(-),触酶(+),血浆凝固酶:玻片法(+),试管法(+),DNA(+),按要求将菌液接种于ID32 STAPH细菌鉴定卡,置37培养24h后用梅里埃ATB细菌鉴定仪自动读 ,判断为非常好的鉴定结果,99.7%符合金黄色葡萄球菌,全部生化反应见表1。将菌株送厦门市CDC做葡萄球菌肠毒素检测,用自动定量酶联荧光免疫分析法测定,选用法国梅里埃公司生产VIDAS葡萄球菌肠毒素(SET2)试剂盒,产品编号:30705,结果判断:TV值小于0.13为阴性、 于或等于0.13为阳性,在此试验中阴性质控样TV值为0.00、阳性质控样TV值为1.00、菌株的TV值为2.32,即该菌株葡萄球菌肠毒素为阳性。表生化反应结果

    3  讨论

    典型的金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落形态为金黄色、圆形、光滑、大而突起、周围有溶血圈;在Baird-Parker平板上为圆形、光滑、突起、直径约23mm、菌落中心呈灰黑色、周围有一浑浊带,在其外层有一透明圈。而此次分离到的金黄色葡萄球菌在血平板上虽为圆形、光滑、周围有溶血圈,但因其不产生色素而呈白色,且菌落较小直径约1mm;在Baird-Parker平板上虽呈黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈(可能是冻干的卵黄较难溶解之故),直径约为0.71mm,很容易导致漏检,又因此菌株为能引起食物中毒的肠毒素阳性的金黄色葡萄球菌,所以提醒各位同仁在金黄色葡萄球菌的检验中,不仅要注意典型菌落,对 种在血平板上呈白色、有透明溶血圈、较小的菌落也要重视,建议先做革兰染色镜检及血浆凝固酶试验筛检,若符合,再继续做各项试验鉴定,以提高金黄色葡萄球菌的检出率,防止漏检。

    【参考文献】

    1  中华人民共和国卫生部/中国国家标准化管理委员会.GB/T4789.14789.31-2003,67-69.食品卫生微生物检验.

    2  俞树荣.微生物学和微生物学检验,第2版.北京:人民卫生出版社,114.

 

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