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烧伤革兰阴性杆菌产β-内酰胺酶和耐药性的研究



录入时间:2011-3-29 10:32:19 来源:医源世界

【摘要】 目的  了解烧伤感染主要革兰阴性(G - )杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶和金属β-内酰胺酶(mBLA)及其对常用抗生素耐药性情况,指导烧伤医院感染合理用药 方法  采用双纸片协同试验检测产ESBLs株,头孢西丁三维试验检测产AmpC酶株,头孢曲松三维试验检测同时产ESBLs和AmpC酶株,依地酸二钠协同试验检测产mBLA株,K-B法进行G - 杆菌药敏试验。 结果  348株G - 杆菌产β-内酰胺酶总检出率56.9%,铜绿假单胞菌、 肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的ESBLs株检出率分别 32.8%、47.2%、41.8%,产AmpC酶阴沟肠杆菌占38.9%,铜绿假单胞菌产mBLA株达12.8%;产β-内酰胺酶株G - 杆菌耐药性显著高于非产酶株(P<0.01)。 结论  烧伤病区应重点加强G - 杆菌耐药性监测,及时准确检测产β-内酰胺酶G - 杆菌有助于正确的抗感染治疗。
      
  A study ofβ-lactamases producing by gram-negative bacilli in and drug resistance burns     
  Li Pingsong,Huang Jinhua,Chen Xiao.
    Department of Burn and Orthopedics,Clinical College,Yangzhou University,Jiangsu225001.
    【Abstract】 Objective To investigate extended-spectrumβ-lactamases(ESBLs)and AmpCβ-lactamases and metalloβ-lactamases(mBLA)producing by gram-negative bacilli in burns.Mehtods Adopitng double-disk synergy test,modified three-dimensional extract test and the enzyme inhibitor of EDTA-Na2to detect ESBLs and AmpC and mBLA producing strains.Using K-B test to perform the susceptibility testing.Results Among348strains of gram negative bacilli,ESBLs,AmpCβ-lactamases,ESBLs combined with ApmCβ-lactamases and mBLA produc-ing strains were found in122,47,9and20strains,the incidence being35.1%,13.5%,2.6%and5.7%respec-tively.ESBLs were detected in47.2%of Escherichia coli,AmpCβ-lactamases were detected in38.9%of Enter-obacter cloacae and mBLA detected in12.8%of Pseudomonas aeruginosa.The drug resistant rate of antibiotics toβ-lactamases positive strains have significantly higher than negative ones.Conclusions Bums department should moni-tor its drugs resistance status,and it's important to select proper method to detectβ-lactamases in time.   
  Key words burn gram negative bacilli β-lactamases nosocomial infection
      
  烧伤感染尤其是耐药性革兰阴性(G - )杆菌导致的严重感染,是烧伤患者的主要死亡原因之 ,抗生素的使用是治疗G - 杆菌感染的重要手段。近年来,由于广泛应用第三代头孢类抗生素等,细菌在抗生素选择性压力作用下,产生β-内酰胺酶(BLA)如超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、Am-pC酶、金属β-内酰胺酶(mBLA)等,对常用抗生素的耐药,而致烧伤抗感染治疗失败,制约了烧伤治疗水平的进一步提高。我们对烧伤主要G - 杆菌进行了产BLA酶及其耐药性的研究,现报道如下。
  
  1 材料和方法
    1.1 菌株来源 2000年1月~2003年12月烧伤科分离出的G - 杆菌共348株,其中来源于创面分泌物247株,血液38株,呼吸道42株,尿道21株,所有菌株按常规分离培养、鉴定菌 。
    1.2 药敏试验 采用K-B法,按NCCLS [1] 2003年版标准判读结果,中介值(I)视为耐药。药敏纸片头孢他啶(CAZ),头孢噻肟(CTX),头孢曲松(CRO),头孢西丁(FOX),氨曲南(ATM),头孢吡肟(FEP),头孢哌酮/舒巴坦(CPZ/SPT),哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TAZ),阿米卡星(AMK),环丙沙星(CIP),亚胺培南/西司他丁(IMP),均为英国Oxoid公司产品。
    1.3 质控菌株 以大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853为产BLA阴性对照及药敏质控株;以肺炎克雷伯菌ATCC700603为产ESBLs阳性对照株,阴沟肠杆菌ATCC029m为产AmpC阳性对照株。
  1.4 产BLA株的检测
    1.4.1 产ESBLs株检测按双纸片协同试验 [2] 。
    1.4.2 产AmpC酶株检测采用纸片扩散法初筛,头孢西丁三维确证试验 [3]。
    1.4.3 同时产ESBLs和AmpC酶株检测 采用头孢曲松三维试验 [4] 。
    1.4.4 产mBLA株检测采用EDTA-Na 2 酶抑制剂协同试验 [5] 。
    
  2 结果    
  348株G - 杆菌产BLA株198株,总检出率56.9%,其中检出产ESBLs122株(35.1%),产AmpC酶47株(13.5%),产mBLA20株(5.7%)。大肠埃希菌产ESBLs株最高,达47.2%,阴汤肠杆菌产AmpC株高达38.9%;铜绿假单胞菌产BLA株占63.2%,且产mBLA达12.8%。348株G - 杆菌产BLA株检出情况见表1。产BLA株G - 杆菌的耐药性显著高于非产酶株,G - 杆菌对IMP的耐药性逐渐升高,对复合酶抑制剂抗生素敏感性明显下降。主要G - 杆菌产BLA株与非产酶株对常用抗生素的耐药性见表2。
  表1 烧伤G - 杆菌产β-内酰胺酶情况(略)
  表2 主要G - 杆菌产β-内酰胺酶株对常用抗生素耐药性的影响(略)
      3 讨论    
  烧伤抗G - 杆菌感染大量使用第三代头孢菌素,在抗生素选择性压力下,产酶菌株不断被检出,且其耐药机制十分复杂,给烧伤临床抗感染治疗带来了极大的困难。目 研究认为G - 杆菌对三代头孢菌素耐药机制主要是产生ESBLs和AmpC酶,不同国家不同医院产BLA株的检出率不一样,检出率的高低表明产BLA株G - 菌的流行状况。AmpC酶属Bush分类中的Ⅰ类酶,常仅对四代头孢菌素如头孢吡肟敏感,不被克拉维酸等酶抑制剂所抑制,对头孢菌素类如头孢西丁耐药;ESBLs酶属Bush分类Ⅱbe型,对酶抑制剂敏感,对头孢菌素类如头孢西丁敏感,而对头孢吡肟耐药;产mBLA酶按Amble结构分类属B类,按Bush功能分类属Ⅲ类BLA,能水解所有β-内酰胺类抗生素包括三、四代头孢菌素及碳青酶烯类,但能被EDTA-Na 2 等金属螯合剂抑制,主要为铜绿假单胞菌产生,是铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗生素耐药的重要机制;产ESBLs、AmpC基因位于质粒上,可以通过转化、转导、转座、接合转移和整合等方式将耐药性在同种或异种菌间传递,引起耐药株的爆发流行[6,7] 。因此必须对细菌产酶情况进行监测。
    本次调查发现348株G - 杆菌产ESBLs株占35.8%,产AmpC株占13.5%。其中肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的产BLA株检出率都超过50%,提示耐三代头孢菌素情况十分严重。本科G - 杆菌产ESBLs株的高检出率与三代头孢菌素的广泛应用有关;而产mBLA株的检出率逐渐增高与临床上普遍以IMP替代三代头孢治疗G - 杆菌感染相吻合。耐IMP的铜绿假单胞菌等G - 杆菌的逐渐检出,也宣告了碳青酶烯类抗生素能克服所有其它β-内酰胺类抗生素耐药时代的终结。
    药敏试验显示产BLA株耐药率显著高于非产酶株,提示烧伤G - 杆菌感染不能经验性使用三代头孢菌素治疗,否则造成抗感染治疗的失败和 产BLA株的定植。对产ESBLs株G - 杆菌严重感染经验用药时,应首选碳青酶烯类,而在产ESBLs株一般感染时,可选用含酶抑制剂或喹诺酮类等;对产mBLA的G - 杆菌感染,可以碳青酶烯类+氨基糖苷类,仍然达到较好的效果。
  调查显示产ESBLs、AmpC酶和mBLA G - 杆菌与非产酶菌耐药谱明显不同,提示其引起的感染治疗原则有显著区别,所以,及时、准确地检出产ESBLs、AmpC酶及mBLA菌株,对指导烧伤临床抗感染合理用药,遏制耐药菌株的播散,延缓抗生素耐药性的产生,具有重要的临床意义。    
  参考文献    
 1 NCCLS.Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests:Approved standard.Eighth Edition,2003,23(1):100.
    2 NCCLS.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing.1999,19(36):75.
    3 Coudron PE,Moland ES,Thomson KS.Occurrence and detection of AmpC beta-lactamases among Escherichia coli,klebsiella pneumonia and proteus mirabilis isolates at aveterans medical center.J Clin Mi-crobiol,2000,38(5):1791-1796.
    4吴伟元,陈民钧,王辉.阴沟肠杆菌去阻遏持续高AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测.中国临床药理学杂志,2001,17(2):104-109.
    5 Arskawa Y,Shibata N,Shibayama K,et al.Convenient test for scr-caning metallo-beta-lactamase-producing Gram-negative by using thiol compounds.J Clin Microbiol,2000,38:40-43.
    6 倪语星.革兰阴性杆菌产β-内酰胺酶的耐药性问题.中华检验医学杂志,2001,24(4):201-203.
    7 佘丹阳,刘玉宁.β-内酰胺类抗生素阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择作用.中华医院感染学杂志,2003,23(4):311-314.     

 

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