小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)广泛分布于自然界,是一种人畜共患的病原微生物,对人以肠道感染为主,并可成为各种疾病的病原。在食品和饮水等受到本菌污染时,往往可引起人的胃肠炎暴发,其症状表现与沙门氏菌食物中毒相似。检验以检出该菌为主,用生化和血清学进行鉴定。该菌生长的最适温度为22~29℃,但它可在0~4℃发育,为嗜冷性致病性细菌,因此,应特别引起注意的是,如被该菌污染的食品,虽在低温保存,但不能防止其生存和繁殖,这与其他肠道致病菌所不同。
为加强食品卫生管理,必须提高对该菌的检验技术,建立和完善检验方法,根据实际应用,对该菌检验在原国家标准方法中所发现的问题进行了试验研究后,对一些检验项目作了改进,提出了本修订方法,以代替原GB 4789.8-84。
小肠结肠炎耶尔森氏菌标准检验方法
一、检验方法
(一)操作步骤
1. 样品采集和处理:与沙门氏菌食物中毒采集和处理相同。
2. 增菌培养:将食品校品接种到改良磷酸盐缓冲液中,增菌液以1:10的比例混合,置4℃冰箱进行冷增菌。
3. 碱处理:取肉及其制品等的冷增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL混合15s。
4. 分离培养:将冷增菌液和碱处理的冷增菌液分别接种CIN-I和改良y培养基,培养于26℃48h后,在CIN-I平板上挑取红色牛眼状菌落。在改良y培养基上挑取无色透明不粘稠的菌落,进行进一步鉴定。
5. 改良克氏双糖试验:将上述可疑菌落接种到改良克氏双糖管中,于26℃、24h培养,将斜面和底部皆变黄者做进一步生化鉴定。
6. 尿素酶试验和动力观察:将改良克氏双糖上的可疑培养物接种到尿素培养基上,注意接种量要大,挑取一接种环,振摇数秒钟,放置26℃培养2~4h,然后将阳性者接种两管半固体,分别放26℃和37℃温箱,培养24h检查,如在26℃有动力者,可进行镜检和进一步生化试验。
7. 染色镜检:将上述可疑菌落做涂片染色,进行显微镜观察,呈革兰氏阴性球杆菌,有时呈椭圆或杆状,大小为0.8~3.0μm×0.8μm者做进一步生化检验。
8. 生化试验:将上述可疑菌落做下列主要生化试验与其他相似细菌进行鉴别。
V-P试验、鸟氨酸脱羧酶试验,山梨醇、甘露醇、蔗糖、棉子糖、鼠李糖等发酵试验。
所有以上生化反应皆为26℃培养。
9. 血清学鉴定:除进行生化学鉴定外,亦可做血清型别的鉴定。目前国内可生产27种O型血清因子,供各地使用,具体操作方法与沙门氏菌O因子血清分型相同。
上一篇:3种培养基对淋病奈瑟氏菌检出结果的比较
下一篇:小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(2)