【摘要】  目的：比较涂片法、实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)法、血清学方法检测血清结核抗体,对结核病临床诊断的应用价值。方法：用涂片法和FQPCR法对1 714份呼吸道和体液标本同步检测，同时检测1 714份血清标本的结核抗体。结果：1 714份送检标本中，总阳性率涂片法为16.3%，FQPCR法为31.6%，血清结核抗体为43.3%；三种方法的灵敏度、特异度分别为:涂片法34.4%和100%,FQPCR法66.4%和100%,血清结核抗体80.7%和90.5%。结论：FQPCR法对结核病尤其是肺外结核的诊断具有较高应用价值；血清学方法检测血清结核抗体可作为菌阴、儿童、无痰患者及肺外结核诊断的一项重要参考指标；涂片法直观、简便、价廉,仍将是结核病实验诊断的重要手段。

 

【关键词】  结核；涂片法；实时荧光定量PCR；血清结核抗体

 

    近年来，随着全球人口流动性的增加，艾滋病的流行以及耐药结核菌株的出现，结核病的发病率不断增加，已成为严重威胁人类生命健康的传染性疾病，受到世界各国的广泛关注。而我国又是全球结核病高负担的国家之一，据2004年WHO估计，我国每年新发结核病例占全球每年新发病例的15%，感染人数居全球第二［1］。而结核病的早期诊断和有效治疗是控制结核病疫情的关键。因此，准确、快捷、简便的实验室检测方法对于结核病的早期诊断和及时治疗具有十分重要的意义。本文应用涂片法、FQPCR法和血清学方法检测结核抗体，三种实验室方法对结核病临床诊断的应用价值进行了比较研究，报道如下。

 

　　1  材料和方法

 

　　1.1  对象

 

　　为我院住院和门诊患者，共1 714例。1 714例患者留取一份呼吸道或体液标本，同时抽取1份血液标本。送检的1 714份呼吸道和体液标本中，痰液标本1 170份，支气管灌洗液355份，胸腔积液83份，脑脊液52份，尿液32份，脓性分泌物8份，淋巴穿刺液9份，关节液4份，血液标本1 714份。1 714例患者中，临床确诊为结核病者815例，其中涂阴535例，涂阳280例；非结核病患者899例，包括慢性阻塞性肺气肿、肺癌、肺炎及其他炎症。

 

　　1.2  仪器与试剂

 

　　FQPCR仪器为瑞士RocheLigtcyer基因扩增仪，TBPCR荧光定量检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。血清结核分枝杆菌抗体诊断试剂（TBDOT）为上海奥普生物医药有限公司生产。

 

　　1.3  检测方法

 

　　对临床送检的1 714份呼吸道和体液合格标本，同一标本同时进行涂片法和FQPCR法检测，并同时对1 714份血液标本进行血清结核抗体检测。涂片法按照有关的实验操作规程进行［2］，FQPCR法和血清结核抗体检测按照试剂盒说明操作。

 

　　2  结果

 

　　2.1  涂片法和FQPCR法对1 714份呼吸道和体液标本的检测结果

 

　　见表1。总阳性率涂片法为16.3%，FQPCR法为31.6%,1 714份血清标本结核抗体阳性743份,阳性率43.3%。

表1  涂片法和FQPCR法对1 714份标本的检测结果例(略)

 

　　2.2  确诊病例的检测结果

 

　　见表2。临床确诊为结核病的815例病例中，涂片法阳性率为34.4%，FQPCR法阳性率为66.4%，血清结核抗体阳性率为80.7%。表2  确诊病例的检测结果例(略)

 

　　2.3  三种检测方法的比较

 

　　见表3。由此可见，三种检测方法的灵敏度，特异度分别为：涂片法34.4%和100%，FQPCR法66.4和100%。血清结核抗体80.7%和90.5%。表3  三种检测方法的比较(略)

 

　　3  讨论

 

    长期以来，结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查［3］。痰涂片检查不仅可以明确结核传染源,而且十分经济,符合我国国情,具有简便、快捷、低廉的优点，但其敏感性低。本文1 714份各类标本阳性率仅为16.3%，特别是体液标本，阳性率仅4.8%（9/189）。

 

    近年来,随着分子生物学技术的飞速发展,PCR技术已被广泛用于结核病的实验室诊断［4～6］。本文应用FQPCR荧光定量法,避免了PCR定性技术特异性差,存在假阳性和假阴性等问题。该方法是利用一对结核分枝杆菌特异性引物和一条结核分枝杆菌特异性荧光探针,配以PCR反应液,耐热DNA聚合酶(Taq酶),四种核苷酸单体(dNTPS)等成分，用体外扩增法检测结核分枝杆菌基因。该方法的检测对象是结核分枝杆菌基因保守片段，动态检测标本中结核杆菌DNA含量，不受细胞表型和耐药性影响，具有较高灵敏度和特异性。本文的1 714份呼吸道和体液标本，FQPCR法阳性率为31.6%，明显高于涂片法。尤其是细菌数含量较少的体液标本，FQPCR法的阳性率更是达到了37.6%（71/189）。

 

    而血清学诊断技术对结核病的检测近年来也有较多报道［7，8］。本文检测方法系采用纯化的结核分枝杆菌特异性外膜抗原，利用斑点金免疫金渗滤试验（DIGFA）原理，用于人血清中结核抗体的检测。本文1 714份血清标本阳性率为43.3%，但由于人群中感染结核分枝杆菌十分普遍，广泛的卡介苗接种等原因，以及结核病患者个体的免疫功能影响等因素，使血清结核抗体测定存在一定的假阳性和假阴性。本文确诊的815例结核病患者中血清结核抗体为阴性157例，占19.3%，非结核病患者899例中有85例抗体假阳性，占9.5%，与文献相符［8］。

 

    综上所述，FQPCR法用于结核病诊断，其特异性强，为100%（899/899），灵敏度66.4%（541/815），明显高于涂片法，且操作简便，只需2 h～3 h既可完成，对于结核病尤其是肺外结核的诊断具有较高的应用价值。血清学方法检测结核抗体特异性较高90.5%（814/899），灵敏度80.7%（658/815）,高于FQPCR法和涂片法,且操作简便、快速、便于推广、无须特殊精密仪器，可作为结核分枝杆菌阴性、儿童、无痰患者及肺外结核诊断中一项重要参考指标。而涂片法作为结核病最基本的细菌学检查方法，它所具有的直观、简便、价廉等优点，仍将是结核病实验室诊断的重要手段。

作者：李晓非，李冬玲，施巧霞，陈育林，吴芳华

作者单位：昆明市第三人民医院，云南 昆明 650041

【参考文献】

  　　［1］王陇德.中国结核病控制现状及展望［J］.中华结核和呼吸杂志,2006,29:505506.

　　［2］中国疾病预防控制中心.痰涂片镜检质量保证手册［M］.北京:中国协和医科大学出版社,2004:518.

　　［3］赵雁林,尚美.我国结核病实验室诊断的现状［J］.中华检验医学杂志,2007,30(7):725728.

　　［4］张诩,卢建平.四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价［J］.中国防痨杂志,2006,28(1):1617.

　　［5］梁晓海,黄平东.实时荧光定量聚合酶链反应法检测肺结核患者痰标本价值的对照研究［J］.现代中西医结合杂志,2006,15(3):287.

　　［6］胡海利.荧光双标记定量检测对诊断结核病的临床意义［J］.上海医药,2002,23(9):411412.

　　［7］庄玉辉.结核病实验室诊断新技术研究应用中值得重视的问题［J］.中华结核和呼吸杂志,1999,22(3):133.

　　［8］陈小玲.血清结核抗体对结核病的诊断价值［J］.现代医药卫生，2003，19（5）：530530.