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    动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素



    录入时间:2011-3-3 9:41:37 来源:中华检验医学网

    【关键词】  复方氨基酸注射液;动态比浊法;细菌内毒素;干扰试验;鲎试剂
     
      1  材料与方法
     
      1.1  材料与试剂 
     
      细菌内毒素检查用水(BET水)(批号030510,规格10 ml/支,厦门鲎试剂厂);鲎试剂(动态浊度法鲎试仪专用,批号030725,规格015 ml/支,厦门鲎试剂厂);细菌内毒素工作品(批号030610,规格10 EU/支,厦门鲎试剂厂);复方氨基酸注射液(3AA)批号200304012,200304121,200305093,200305161,200306222,规格250 ml/瓶,湖北峰江);BET32型细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂);ZH2自动漩涡混合器(天津药典标准仪器厂);实验所用玻璃器皿经铬酸洗液处理后,再经250℃干烤1h以上,除去外源性内毒素。
     
      1.2  方法与结果
     
      1.2.1  实验条件:检测温度为37℃;检测波长为660 nm;最长检测时间为8400 s。
     
      1.2.2  细菌内毒素限值(L)的确定[1]:按公式L=K/M,K为静脉注射给药的细菌内毒素阈剂量=50EU·ml-1,M为病人每千克体重每小时最大给药剂量。本文采用家兔热原剂量M=10ml·kg-1·h-1,则复方氨基酸注射液(3AA)细菌内毒素限值(L)为0.5EU·ml-1。
     
      1.2.3  标准曲线制备及可靠性:取细菌内毒素工作品1支加BET水10 ml,用封口膜封口,置漩涡混合器上混合15 min,进行10倍稀释,然后2倍稀释,且各步置漩涡混合器上混合30 s,使其最终内毒素浓度为1.0,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156EU·ml-1稀释系列,各取0.15ml分别加到预先加有0.15ml鲎试剂的反应管内,混合均匀,插入浊度仪进行检测。每一浓度平行3管,同时用BET水做2管阴性对照(NC),结果见表1。表1  标准曲线的可靠性内毒素浓度(略)
     
      1.2.4  供试品溶液配制及干扰试验:①供试品最大有效稀释倍数(MVD)计算:按公式MVD=L×C/λ,L为复方氨基酸注射液(3AA)的内毒素限值0.5 EU·ml-1,λ为标准曲线最低浓度0.0156 EU·ml-1,C为供试液浓度。当L以EU·ml-1表示时,C为10 ml·mL-1得样品试验时最大有效稀释倍数(MVD)为32倍。②干扰预试验:将3批复方氨基酸注射液(3AA)用BET水稀释为2、4、6、8倍溶液,每个浓度分别取0.15 ml加0.15 ml鲎试剂作为样品检查(Et);同时另取5管,进行同样倍数稀释,并在各浓度溶液中强化0.125 EU·ml-1的内毒素作为样品阳性对照液(Es),分别取上述各液0.15 ml加入预先加有0.15 ml鲎试剂的反应管内进行检测,每个浓度重复3管,并设阴性对照,分别测定各浓度样品液及阳性样品的内毒素含量Et和Es,按下式计算回收率(R)。R=(Es-Et)/0.0125×100%,结果见表2。表2  供试品干扰预实验样品批号稀释倍数Et(略)     
       
      根据中国药典2000年版规定,如果内毒素的回收率在50%~200%之间时,则供试品在该试验条件下不存在干扰因素。表2结果表明,3批供试品在各倍稀释时均无干扰作用,4倍时回收率较好,可作为定量检测的浓度。
     
      1.2.5  供试品干扰试验与家兔法检查:取5批复方氨基酸注射液用BET水稀释4倍,并制备样品阳性对照,每个浓度重复3管,并做阴性对照,放入检测仪检测,同时进行家兔法检查,结果阴性对照阴性,其他数据见表3。表3  干扰试验样品批号稀释倍数Et(略) 
        
      2  讨论
     
      实验结果表明,各倍稀释液对鲎试剂不存在干扰作用,4倍可以得到很好的回收率,且动态浊度法进行细菌内毒素定量检测,使用计算机全过程监控,样品反映情况能在显示屏上直观地反映出来,与传统的家兔法相比,避免了动物个体差异及人为判断误差所造成的假阳性或假阴性结果,具有灵敏、简便、结果准确等优点,其检测结果与家兔热原检查结果一致。因此,用动态浊度法检测复方氨基酸注射液(3AA)中细菌内毒素含量是可行的。
    作者:宋威 贺德勇   《滨州医学院学报》 2006 年 2 月 第 29 卷 第 1 期
     
      参  考  文  献
     
     
      1. 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值[J].药物分析杂志,1995,15(3):54
      2. 中国药典.二部[S].2000(附录). 204

     

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