摘 要  目的:探讨沙眼衣原体K血清型感染细胞IL-6分泌水平及其意义。方法:用ELISA双抗体夹心法检测沙眼衣原体感染细胞培养上清IL-6水平的变化。结果:沙眼衣原体感染McCoy细胞在沙眼衣原体感染后36h、48h、60h、IL-6分泌量分别为1.3655±0.0046、2.9601±0.0104、4.0408±0.0722，均显著高于相应的对照组（P<0.05），并且随感染时间的延长IL-6分泌水平显著地逐步增高（P<0.05）。结论:沙眼衣原体K血清型感染可诱导McCoy细胞分泌IL-6，并且呈时间依赖性。

 

    关键词  沙眼衣原体;McCoy细胞;白细胞介素-6

 

     沙眼衣原体（Ct）的致病机制涉及机体的免疫防御和免疫病理反应，白细胞介素6（IL-6）作为重要的炎症因子和免疫介导因子可能参与沙眼衣原体感染的致病过程。据报道，Ct能诱导体外培养的上皮细胞、人单核细胞、淋巴细胞等多种细胞产生IL-6等细胞因子［1，2］ ，而有关沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌细胞因子的报道尚少。本文检测沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞分泌IL-6水平，旨在为寻求衣原体感染性疾病的防治措施及进一步的研究提供参考。

 

    1 材料

 

    沙眼衣原体K血清型由中山医科大学宁波教授惠赠，McCoy细胞由湘雅医学院病毒研究室惠赠，IL-6ELISA试剂盒（晶美公司产品），RPMI-1640（GIBCO产品）。

 

    2 方法

 

    2.1 衣原体增殖

 

    取一瓶单层McCoy细胞，弃上清，加1mL衣原体悬液至培养瓶中，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。加无双抗的RPMI-1640培养基（含10%小牛血清、1μg/mL放线菌酮），置37℃、5%CO 2 培养箱培养48h取出，冻融，500g离心10min，取上清（含衣原体），分装于无菌

 

    小试管，70℃冰箱保存备用。

 

    2.2 衣原体滴定

 

    将增殖后的衣原体作系列稀释，接种于已经形成McCoy细胞单层的24孔培养板，培养48h，用荧光标记的抗衣原体单克隆抗体染色后于荧光显微镜下计数感染细胞百分率，并计算ID50值。 2.3. ELISA检测IL-6含量

 

    在已形成McCoy细胞单层的24孔培养板中接种1ID50衣原体，并设正常细胞对照，3000r/min离心1h，37℃、5%CO 2 培养箱培养2h，弃上清。每孔加含10%小牛血清的RPMI-1640培养基1mL，37℃、5%CO 2 培养箱培养。于36h、48h、60h分别取培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测IL-6含量（按试剂盒使用说明书操作）。在酶标仪上用405nm波长测OD值。将试剂盒提供的IL-6标准浓度与测得的OD值经SPSS统计软件做标准曲线，得出回归方程，根据样本的OD值计算其IL-6含量。

 

　　 2.3 统计学处理

 

    实验结果用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较用单因素方差分析，显著性差异以P<0.05为准。

 

    3 结果

 

    3.1 标准曲线

 

    将IL-6标准品含量与测得的OD值用SPSS统计软件处理获得IL-6含量标准曲线（见图1），得出回归方程为:Y=1.9505+0.5967LnX（Y为OD值，Ln是以e为底的自然对数，X为IL-6浓  度）。 图1 IL-6含量标准曲线

 

    3.2. ELISA双抗体夹心法检测IL-6的浓度

 

    结果见表1、图2。Ct感染后36h、48h、60h细胞培养上清中IL-6的含量均显著高于相应的对照组（P<0.05），且随感染时间的延长IL-6含量显著地逐步增高（P<0.05）。 表1 沙眼衣原体感染McCoy细胞分泌IL-6 *与对照比较P<0.05，△与36h Ct组比较P<0.05，▲与48h Ct组比较P<0.05 图2 沙眼衣原体感染McCoy细胞分泌IL-6的ELISA检测结果

 

 

    3 讨论

 

 

    IL-6为具有广泛生物学效应的细胞因子，具有双向免疫调节作用，也是机体炎症反应和一系列病理生理过程的重要介质。近年研究表明，Ct的致病机制与机体的免疫防御和免疫病理过程有关。细菌的脂多糖、病毒RNA、感染产生的中介物质均能刺激感染细胞及免疫细胞产生IL-6。李海燕等报道，沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中IL-6水平升高，IL-6水平与Ct的亚临床感

 

 

    染或持续性感染状态密切相关 ［3］ 。本实验用双抗 体夹心法检测IL-6分泌水平，结果显示，Ct感染McCoy细胞引起IL-6分泌水平明显增高，与文献报道衣原体感染沙眼衣原体可促进体外培养的上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等分泌IL-6的结果类似 ［1，2］。提示Ct感染后诱导细胞产生的IL-6可能通过调节机体的免疫功能而参与Ct感染的致病过程，且可能影响Ct感染的状态。上述结果有待体内和临床实验进一步证实。

 

 

    文献报道，Ct感染的Hela细胞培养上清中24h可检测到前炎症性细胞因子IL-8显著增加，72h后达高峰，3d后，IL-8分泌开始下降，可能与Ct繁殖周期48h～72h有关［4］ 。本实验结果显示，Ct感染的McCoy细胞在感染后24h分泌前炎症细胞因子IL-6的水平显著高于对照组，且呈时间依赖性。提示Ct感染的McCoy细胞分泌IL-6的水平也许与Ct的繁殖周期有关。本实验未检测衣原体感染72h及72h后IL-6的分泌水平，故有待于进一步研究阐明。

 

 

    IL-6和TNF、IL-1、IL-8等多种细胞因子协同构成复杂的炎性细胞因子网络，参与多种炎症性疾病的病理过程 ［5］。有文献报道，Ct感染的U937细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α等多种细胞因子［6］ ，可能沙眼衣原体感染的McCoy细胞还产生其他的细胞因子，具体产生那些细胞因子及其相互作用，有待进一步研究。

 

作者：张雄鹰 查国章 武延隽 余平   《长治医学院学报》 2005 年 12 月 第 20 卷 第 4 期

 

    参考文献

 

    ［1］ Rasmussen SJ，Eckmann L，Quayle AJ，et al.Secretion of proin-flammatory cytokines by epithelial cells in response to chlamydia infec-tion suggests a central role for epithelial cells in chlamydia pathogene-sis.J Clin Invest，1997，99（1）:77.

 

    ［2］ Netea MG，Selzman CH，Kullberg BJ，et al.Acellular compo-nents of Chlamydia pneumoniae stimulate cytokine production in human blood mononuclear cells.Eur J Immunol，2000，30（2）:541.

 

    ［3］ 李海燕，梁占光.沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的测定.中华妇产科杂志，2000，35（7）:411.

 

    ［4］ 余俊龙，余 平，李立新，等.沙眼衣原体感染诱导Hela细胞分泌IL-8和IL-10.湖南医科大学学报，2003，28（2）:174.

 

    ［5］ Old LJ.Tumor necrosis factor.polypeptide mediator network.Na-ture，1987，326:330.

 

［6］ Rothermel CD，Scachter J，Lanrich P，et al.Chlamydia tra-chomatis induced production of interleukin-1by human monocyte.In-fect Immun，1989，57:2705.