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影响微生物检验质量的因素分析



录入时间:2011-2-18 9:58:03 来源:中华检验医学网

 为了保证微生物检验结果的准确性和可靠性,微生物实验室必须建立质量控制体系,充分考虑到影响检验结果的因素并加以控制,可提高微生物检验工作的质量。
 
 
    1  实验室设施和环境条件的要求
 
 
    由于受经济和技术条件限制,目前不少微生物实验室仍将实验用房简易分隔成操作间和缓冲间,操作间又分隔成许多小隔离区,如霉菌区等,并靠安装几支紫外线消毒灯,以达到隔离与消毒的目的。这种实验室格局在一部分医疗单位还在使用,并以菌落数等一些技术参数为控制指标,这些显然已跟不上医学发展的要求。较完善的微生物实验室一般应具备无菌实验室、净化实验室、生物安全实验室等,净化实验室应采用封闭过滤除菌,通风方式、吊顶、隔墙、围护全部采用彩钢板,地面作环氧树脂自流平处理,并设置非净化区、更衣区、净化区。净化实验室应定期进行风速监测和及时更换过滤层罩,条件有限的实验室可使用超净工作台;无菌室应配紫外线消毒装置,在使用前后都应用紫外线灯照射消毒,并定期进行紫外线强度和空气质量监测;生物安全实验室除了正常管理、维护之外,要注意空气过滤的质量和工作人员的隔离防护。
 
 
    2  实验操作人员的作用
 
 
    微生物实验室的质量可以通过正确的操作来体现,例如,革兰氏染色,可以通过对标准质控菌株的染色来反映操作和试剂的质量,这是有形的、看得见的,然而,质量保证更依赖工作人员的认知能力。一个受过充分培训的、能够严谨地分析实验结果的工作人员,不是只能忠实地记录实验数据,而是可以实施更加严格的标准。在微生物检验中会遇到一些不常见结果或一些散在地发生的错误,例如,试验中发现的少见菌、从未见过的药敏表型、污染率的增加等,往往通过一些质控方法难以检查出来,但具有质量意识的微生物技术人员能对这些现象质疑,及时纠正,保证结果的准确可靠。
 
 
    3  采样及培养基和试剂的购置
 
 
    有质量保证的样品是获得正确检验结果的基础。虽然样品种类繁多,但不同品种的样品都要按照国家规定的标准方法进行采样,每个样品要登记并注明名称、数量、批号、采样日期等。不同的样品要采用不同的运输和保存方法,防止样品在运输和保存过程中微生物数量的改变。微生物实验室可根据各自情况参照国际食品规格委员会(ICMSF)推荐的食品采样方法和标准建立可靠的质量评价方法以保证样品合格[1]。购置培养基和试剂时要求供应商提供产品质控证书,尽量选择通过ISO9001的生产厂家购买。培养基和试剂使用前首先通过外观、批号、pH值、灭菌要求、选择性等进行初步评估,还要用阳性对照菌株做质控,按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件保存,不同批号的培养基和试剂不要混合使用。自配的染液每周必做质控。如果有条件可参照国际食品微生物与食品卫生委员会(ICFMH)提供的关于培养基质控方法进行质控。
 
 
    4  样品处理与培养
 
 
    按照检验目的不同的样品要采用不同的处理方法。对于固态样品用均质器以无菌操作方法处理样品,可调节均质器均质时间处理不同种类的样品。均质器、培养箱、冰箱等仪器设备要通过计量认证。微生物培养时要准确记录温度、气体浓度等参数,使其严格符合检验程序要求。定期对实验用仪器设备进行正确维护、校准和质控[2]。
 
 
    5  菌株保存
 
 
    标准菌株和从样品中分离出的菌株,其保存方法有多种,最理想的为真空冷冻干燥法,但这种方法的操作技术难度大,花费高,需特殊设备,一般单位不易做到。而常规琼脂斜面保存法,常因传代次数多,易污染,易变异。近几年来,采用卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种,效果很好[3]。
 
 
    6  检验方法的选择
 
 
    检验方法是微生物实验室质量保证的重要步骤,它必须统一、准确可靠。检验方法优先采用国家规定的标准检验方法或国际标准、行业标准、地方标准规定的检验方法,无上述标准时,经协商也可采用企业标准。在检验过程中还要注意三点:(1)做平行样,以保证结果的可比性;(2)设立空白对照,以防止其他污染而导致的结果不准确;(3)设计合适的质控频率,进行质控试验。将质控菌株与常规工作一起进行,不能为质控菌株设计单独操作程序,更不能专人专做。当质控标准菌株的内在敏感性发生改变时要更换新的菌种。
 
 
    7  确证试验和实验室校准
 
 
    用阴性、阳性标准菌株做确证试验,特别在做微生物生化试验和免疫试验时一定要设立阴性、阳性对照组。建立试验室内部失败报告、内审制度,记录整个实验过程中的错误信息;参加室间质控评比,不断提高实验技术水平;及时更新程序性文件,完善实验室质量保证体系。
作者:王钉钉  中华医学研究杂志 2006年3月 第6卷 第3期
 
 
    【参考文献】
    1  ICMSF, Sampling for Microbiological Analysis. Toronto, University of Toronto Press, 2nd, 1986.
    2  陈剑刚. B/T15481-2000标准在卫生检验质量控制中的应用. 中国卫生检验杂志,2002,12(4):487.
    3  沈德心,封志纯,杜江.一种实用菌种的保存方法.中国卫生检验杂志,2003,13(6):757.

 

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