【摘要】 ［目的］调查我院2006年9月～2007年8月住院患者送检标本分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药水平，并分析亚胺培南耐药株对其他常用抗菌药物的耐药性。［方法］临床标本分离的铜绿假单胞菌用常规K-B方法进行药物敏感性试验，若结果判定为耐药和中介，则进一步采用琼脂倍比稀释法检测铜绿假单胞菌对亚胺培南及其他10种抗菌药物的MIC。［结果］铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为13.7%，22株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对10常用种抗菌药物的耐药率也普遍较高，有3株铜绿假单胞菌对受试的11种抗菌药物全部耐药。［结论］铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高，并对多种抗菌药物耐药，应引起高度重视。
【关键词】 铜绿假单胞菌；亚胺培南；MIC；耐药率
Surveillance of Resistant Level of Pseudomonas Aeruginosa to Imipenem and the Analysis of Antimicrobial Susceptibility
Abstract：［Objective］To survey the imipenem（IMP）resistance of Pseudomonas aeruginosa isolated from hospitalized patient，and analysis of antimicrobial susceptibility of imipenem-resistant strains.［Methods］The MIC values of resistance of Pseudomonas aeruginosa to IMP and other 10 antimicrobial agents were tested by agar-plating diluted technique.［Results］The resistant rate to IMP resistance of Pseudomonas aeruginosa was the percent of
Key words：pseudomonas aeruginosa；imipenem：minimal inhibitory concentration；resistance
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA），是一种常见的院内获得性感染条件致病菌，在医院感染病原菌的检测中检出率最高，对多种抗菌药物表现为天然或获得性耐药。碳青霉烯类抗生素如亚胺培南曾是临床上使用的抗PA较为有效的药物，但近年来随着亚胺培南在临床的广泛应用，PA对其耐药率呈上升趋势，上海地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率高达20％［1］。我们对分离的PA对亚胺培南的耐药情况进行了调查，同时就耐药株对其他常用抗菌药物的敏感性进行分析，为临床治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
全部40株铜绿假单胞菌均分离自我院2006年9月至2007年8月临床各科送检的住院患者标本。临床分离株的鉴定按照常规K-B方法进行，按照美国临床和实验室标准委员会（CLSI）标准进行操作和判断，并判定为耐药和中介菌株，除去重复菌株，用15%甘油LB肉汤保存于
1.2 培养液和药敏抗生素
Mueller-Hinton（MH）琼脂购自法国生物梅里埃公司，批号：811813401。亚胺培南（IPM）购自杭州默沙东制药有限公司，批号：06121；美罗培南（MEM）购自日本住友制药株式会社，批号：10080；哌拉西林（PRL）购自华西制药集团，批号：20070401；哌拉西林/他唑巴坦（TZP）购自美国惠氏-百宫制药有限公司，批号：B770308；头孢他啶（CAZ）购自海南海灵制药有限公司，批号：060801；头孢吡肟（FEP）购自中美上海施贵宝制药有限公司，批号：0604791；头孢哌酮（CP）购自辉瑞制药有限公司，批号：75835017；头孢哌酮/舒巴坦（SCF）购自辉瑞制药有限公司，批号：65839296；环丙沙星（CIP）购自拜耳医药保健有限公司，批号：BXBWE67；氨曲南（ATM）购自江西制药有限公司，批号：0512071；丁胺卡那（AK）购自旭东海普药业有限公司，批号：060213。
1.3 抗菌药物最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）测定
采用琼脂倍比释法测定各种抗菌药物的MIC。根据2006年美国临床实验室标准化协会（CLSI/NCCLS）标准，亚胺培南的MIC≤4μg/ml为敏感，MIC≥16μg/ml为耐药，MIC值在4～16μg/ml之间的菌株归入耐药组进行比较。
2 结果
2.1 共分离培养获得铜绿假单胞菌161株，通过K-B纸片扩散法检出亚胺培南耐药或中介的菌株共40株。
2.2 铜绿假单胞菌对亚胺培南的MIC测定
本组40株PA中MIC≤4μg/ml的菌株18株，MIC≥16μg/ml的菌株10株，MIC介于4～16μg/ml之间的菌株12株，故2006年9月～2007年8月我院共检出耐亚胺培南的铜绿假单胞菌22株，占同期全部检出的铜绿假单胞菌161株的13.7%，其耐药率为13.7%（22株/161株）。
2.3 铜绿假单胞菌的标本分布
22株铜绿假单胞菌分别来自呼吸道标本14份，脓液3份，中段尿2份，血液1份，创面分泌物1份，腹水1份。
2.4 耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对其他抗生素的敏感率 22株PA对其他10种被认为对铜绿假单胞菌疗效较好的受试抗菌药物的敏感性，以哌拉西林/他唑巴坦最为敏感，敏感率为72.7%，其次为哌拉西林和头孢哌酮，敏感率分别为68.2%和63.7%。对环丙沙星耐药率最高，为68.2%。另外，发现3株对所有抗生素全部耐药的多重耐药株。
3 讨论
随着其临床应用的增加，铜绿假单胞菌对其耐药率呈上升趋势。我院2006年9月～2007年8月从住院患者送检的各类标本中共分离出铜绿假单胞菌161株，经K-B纸片扩散法检出耐亚胺培南的菌株共40株。本试验采用美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS，2002年）所推荐的琼脂倍比稀释法，PA对常用抗菌药物的MICs琼脂倍比稀释法测定MIC后，发现40株PA中耐亚胺培南的菌株仅为22株，较K-B法低，分析可能的原因：K-B纸片扩散法为初步筛查，琼脂倍比稀释法则更精准地测定出抗菌药物的MIC，且所有操作步骤均有标准菌株作质控保证。传统的纸片法虽简便易行，但要求严格的质控和操作才能获得可信的结果，如药敏纸片厚度或纸片受潮等因素，都可能导致结果出现偏差。琼脂稀释法可精确测定细菌的MIC，但操作烦琐，工作量大，故临床测定亚胺培南的耐药率仍依赖于K-B法，但需严格执行质控，并结合临床，以确保检验结果。
耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其他抗菌药物也存在一定的耐药性，根据本组试验结果，22株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌总体上对哌拉西林/他唑巴坦、哌拉西林、头孢哌酮和头孢他定有一定敏感性，可作为临床用药选择时的参考。由于ＰＡ对常用抗生素的敏感性不断下降以及耐药性不断变化，而不恰当的治疗会筛选出多种多样的耐药菌株，这对抗菌药物的应用提出了严峻的挑战。本组22株耐亚胺培南的PA中就发现3株对所有抗生素全部耐药的多重耐药株，对于由这类多重耐药菌株引起的呼吸道感染，可采用多粘菌素或妥布霉素雾化吸入治疗。
本组22株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对美罗培南的敏感率为50%，提示亚胺培南与美罗培南耐药机制不尽相同。美罗培南是不经过特殊通道扩散的，细菌外膜的低通透性合并主动外排系统起作用是它对PA形成低水平耐药性的主要机制。国外有研究表明［7］，对美罗培南耐药的铜绿假单胞菌94.7％对亚胺培南耐药，而对亚胺培南耐药的菌株只有47％对美罗培南耐药，且美罗培南体外活性是亚胺培南的2倍，对部分耐亚胺培南菌株有效，故临床上可美罗培南治疗亚胺培南耐药的菌株，但仍需密切监测药敏结果。
作者：李群 丁星 张杏怡 周新 《浙江中医药大学学报》
【参考文献】
［1］Wang F，Zhu DM，Hu FP.Surveillance of bacterial resistance in Shanghai in 1999［J］.National Medical Journal of China，2001，7(2) ：117.
［2］朱德妹，汪复，胡付品，等.2002年上海地区细菌耐药性监测［J］.中华传染病杂志，2004，22（3）：154-159.
［3］蒋伟，常东，黄志红，等.临床检出细菌的耐药现状分析［J］．中华医院感染学杂志，2002，12（9）：646-648.
［4］徐盈斌，利天增，祁少海，等.1993-1999年烧伤科细菌学调查及耐药性分析［J］.中华烧伤杂志，2002，18（3）：159-162.
［5］Gladstone P，Rajendran P，Brahmadathan K.Incidence of carbapenem resistant nonfermenting gram negative bacilli from patient with respiratory infection in the intensive care units［J］.Indiian Journal of Medical Microbiology，2005，23（3）：189.
［6］胡佩村，李婉霞，廖一平.呼吸内科下呼吸道感染的感染的细菌分布及药物敏感分析［J］.中华医院感染学杂志，2006，16(6)708-710.
［7］Troillet N，Samore MH，Carmeil M，et al.Imipenem resistant Pseudomonas aeruginosa respiratory infections due to contaminated nebulizers［J］.J Hosp Infect，1996，33：63.
