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无菌体液细菌培养的新方法探讨



录入时间:2011-1-19 9:04:32 来源:中国论文下载中心

【摘要】  目的:探讨无菌体液培养的最佳方法。方法:对278份无菌体液标本用双相液体培养基法和直接接种法培养分离细菌。结果:双相液体培养基检测278份标本,40份培养出细菌,阳性率为14.4%,直接接种法培养19份标本培养出细菌,阳性率为6.8%,经SPSS 11.5软件处理,χ2检验,P<0.01,差异有非常显著性。结论:用双相液体培养基法培养无菌体液标本,可明显提高细菌检出率,是较好的方法。
【关键词】  无菌体液;细菌培养;双相液体培养基
    无菌体液(胸腹水、关节液、胆汁、脓液等)标本细菌培养是诊断各种细菌感染的一种重要方法。直接接种法(传统方法)细菌培养阳性率低,往往易造成误诊,为改变上述现状,作者经过两年的研究,终于发现一种新的细菌培养方法,即能做到床边接种又能增菌分离,现报告如下。
  1  材料和方法
  1.1  材料
  1.1.1  标本来源 
  278份标本为我院住院患者标本,其中胸腔积液52份,腹水51份,脑脊液49份,腹透液53份,胆汁37份,脓液36份。
  1.1.2  培养基 
  双相液体培养基(上海奥普生物医药有限公司提供)。
  1.2  方法
  1.2.1  标本采集
  1.2.1.1  双相液体培养基接种法 
  临床医生床边采样(立即接种),无菌操作采集无菌体液标本≥3 ml,注入双相液体培养瓶内, 充分混匀,并覆盖整个固相培养基,立即送实验室,置35℃孵育箱培养。
  1.2.1.2  直接接种法 
  用接种环直接接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板,置35℃孵育箱培养。
  1.2.2  结果判断 
  次日将培养瓶取出,观察液体是否混浊,固相是否有菌落和菌苔生长,若无菌生长或混浊,继续培养。如有菌生长,立即涂片染色镜检、鉴定和药敏实验,48 h无菌生长,报告未见细菌生长。
  1.2.3  鉴定 
  涂片、染色分属后,采用珠海黑马生物鉴定板进行鉴定、药敏[1,2]。
  2  结果
  2.1  两种方法检测分离出的细菌标本数 
  用双相液体培养基检测278份标本,40份培养出细菌,阳性率为14.4%。胸腔积液标本阳性8份,阳性率15.4%,腹水标本阳性8份,阳性率15.7%,脑脊液标本阳性5份,阳性率10.2%,腹透液标本阳性8份,阳性率15.1%,胆汁标本阳性6份,阳性率16.2%,脓液标本阳性5份,阳性率13.9%;而用直接法培养,仅有19份标本培养出细菌,阳性率为6.8%。各标本培养出的阳性标本数分别是:胸腔积液5份,腹水4份,脑脊液2份,腹透液3份,胆汁3份,脑脊液2份;阳性率分别是:9.6%、7.8%、4.1%、5.7%、8.1%、5.6%。经统计学软件SPSS 11.5处理,χ2检验,P<0.01,结果差异有非常显著性。
  2.2  两种方法检出时间及阳性率 
  用双相液体培养基培养检出40株细菌,18 h~24 h检出38株(95%),24 h~48 h检出2株(5%);直接法培养检出19株细菌,18 h~24 h检出16株(84%),24 h~48 h检出3株(16%),各菌属细菌检出时间情况见表1。表1  双相液体培养基和直接法各菌属细菌检出时间份(略)
2.3  双相液体培养基内检出细菌种类 
  278份标本在双相液体培养基内检出40株细菌,肠杆菌属15株(37.5%),葡萄球菌属8株(20.0%),肠、链球菌属6株(15.0%),非发酵菌6株(15.0%),真菌5株(12.5%),各菌属检出情况见表2。表2  双相液体培养基检出的细菌种类份(略)
  3  讨论
    双相液体培养基是由固相和液相组成。固相是一块透明的琼脂面,固定在瓶内壁的一侧,含多种营养物质,能观察到菌落和菌苔,直接作鉴定和药敏。液相肉汤也含有丰富的营养成分,如多种生长因子、氨基酸、血红素、维生素B6等,除常见菌生长良好外,苛养菌也生长较好。
    本研究从278份体液标本中分离出40株细菌,其阳性率为14.4%,而直接接种法278份标本只分离出19株细菌,阳性率为6.8%,经χ2检验(P<0.01),差异有非常显著性。双相液体培养基阳性率比直接接种法高1倍多。该培养基阳性检出率高的主要原因有:做到标本及时接种(床边接种),而直接接种(传统方法)从采样到接种耗时较长,尤其不能及时接种时,易造成某些细菌死亡,影响培养结果。标本接种量大,约3 ml,而直接接种法标本量少,约10 μl。双相液体培养基固相可以分离细菌,液相具有增菌作用,其营养成分丰富,适宜大部分细菌快速生长。每天8时、11时、15时、18时四次充分混匀,及时接种,有利于细菌快速生长,提高检出率。
    表1显示:该培养基阳性检出时间,24 h内检出阳性数占95%,24 h~48 h内检出阳性数5%,于直接接种法阳性检出基本一致,与仪器血培养仪作体液标本培养相比检出时间快一倍[3]。因为仪器阳性报警后,需要转种分离分纯18 h~24 h后才长出细菌。
    278份标本在双相液体培养基内检出40株21种细菌,尤其是检出苛养菌,还培养出既往用直接接种法很少培养出的少见菌,说明培养基适合多种细菌生长。从表2检出细菌构成比的情况看,前三位是肠杆菌科细菌(37.5%)、葡萄球菌属(20.0%)、非发酵菌(15.0%),与文献报道一致[4,5]。
    此法从采样到培养操作简单,由医生直接接种,标本送实验室,不需转种平板,直接放入孵育箱培养,固相长出菌后可作鉴定药敏,48 h未见细菌生长可发阴性报告。
综上所述,双相液体培养基能做到体液标本及时接种,操作简单,节省时间,阳性检出率高,结果快速准确,双相液体培养基检测法是快速诊断患者细菌感染的一种较好的方法。
 
 作者:王升,张红升 《实用医技杂志》
【参考文献】
    [1]叶应妩,王毓川.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社,1997:437575.
  [2]张卓然,倪语星.临床微生物学和微生物学检验[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2006,278.
  [3]张智洁,孙继梅,刘勇.应用VITAL-200全自动血培养仪.进行血液及无菌体液培养的临床评价[J].中华医院感染学杂志,2002,12(1):7778.
  [4]蒋燕群,卫国,倪语星.应用全自动血培养仪提高血液、无菌体液培养阳性率[J].中华医学检验杂志,1999,22(2):7173.
[5]王湛.使用双相血培养瓶进行临床血液及无菌体液培养结果分析[J].河北医药,2001,23(1):5152.
 
 

 

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