【摘要】  目的：探讨无菌体液培养的最佳方法。方法：对278份无菌体液标本用双相液体培养基法和直接接种法培养分离细菌。结果：双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为14.4％，直接接种法培养19份标本培养出细菌，阳性率为6.8％，经SPSS 11.5软件处理，χ2检验，P<0.01,差异有非常显著性。结论：用双相液体培养基法培养无菌体液标本，可明显提高细菌检出率，是较好的方法。

【关键词】  无菌体液；细菌培养；双相液体培养基

    无菌体液(胸腹水、关节液、胆汁、脓液等)标本细菌培养是诊断各种细菌感染的一种重要方法。直接接种法(传统方法)细菌培养阳性率低,往往易造成误诊,为改变上述现状,作者经过两年的研究,终于发现一种新的细菌培养方法，即能做到床边接种又能增菌分离，现报告如下。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  标本来源 

　　278份标本为我院住院患者标本，其中胸腔积液52份，腹水51份，脑脊液49份，腹透液53份，胆汁37份，脓液36份。

　　1.1.2  培养基 

　　双相液体培养基(上海奥普生物医药有限公司提供)。

　　1.2  方法

　　1.2.1  标本采集

　　1.2.1.1  双相液体培养基接种法 

　　临床医生床边采样(立即接种)，无菌操作采集无菌体液标本≥3 ml,注入双相液体培养瓶内, 充分混匀,并覆盖整个固相培养基,立即送实验室，置35℃孵育箱培养。

　　1.2.1.2  直接接种法 

　　用接种环直接接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板，置35℃孵育箱培养。

　　1.2.2  结果判断 

　　次日将培养瓶取出,观察液体是否混浊,固相是否有菌落和菌苔生长,若无菌生长或混浊,继续培养。如有菌生长,立即涂片染色镜检、鉴定和药敏实验，48 h无菌生长,报告未见细菌生长。

　　1.2.3  鉴定 

　　涂片、染色分属后，采用珠海黑马生物鉴定板进行鉴定、药敏［1，2］。

　　2  结果

　　2.1  两种方法检测分离出的细菌标本数 

　　用双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为14.4％。胸腔积液标本阳性8份，阳性率15.4%,腹水标本阳性8份，阳性率15.7%,脑脊液标本阳性5份，阳性率10.2%,腹透液标本阳性8份，阳性率15.1%，胆汁标本阳性6份，阳性率16.2%,脓液标本阳性5份，阳性率13.9%；而用直接法培养，仅有19份标本培养出细菌，阳性率为6.8％。各标本培养出的阳性标本数分别是：胸腔积液5份，腹水4份，脑脊液2份，腹透液3份，胆汁3份，脑脊液2份；阳性率分别是：9.6%、7.8%、4.1%、5.7%、8.1%、5.6%。经统计学软件SPSS 11.5处理，χ2检验，P＜0.01,结果差异有非常显著性。

　　2.2  两种方法检出时间及阳性率 

　　用双相液体培养基培养检出40株细菌，18 h～24 h检出38株（95％），24 h～48 h检出2株（5％）；直接法培养检出19株细菌，18 h～24 h检出16株（84%），24 h～48 h检出3株（16%），各菌属细菌检出时间情况见表1。表1  双相液体培养基和直接法各菌属细菌检出时间份(略)

2.3  双相液体培养基内检出细菌种类 

　　278份标本在双相液体培养基内检出40株细菌，肠杆菌属15株（37.5％），葡萄球菌属8株（20.0％），肠、链球菌属6株（15.0％），非发酵菌6株(15.0%)，真菌5株（12.5％），各菌属检出情况见表2。表2  双相液体培养基检出的细菌种类份(略)

　　3  讨论

    双相液体培养基是由固相和液相组成。固相是一块透明的琼脂面，固定在瓶内壁的一侧，含多种营养物质，能观察到菌落和菌苔，直接作鉴定和药敏。液相肉汤也含有丰富的营养成分，如多种生长因子、氨基酸、血红素、维生素B6等，除常见菌生长良好外，苛养菌也生长较好。

    本研究从278份体液标本中分离出40株细菌，其阳性率为14.4％，而直接接种法278份标本只分离出19株细菌，阳性率为6.8％，经χ2检验（P<0.01)，差异有非常显著性。双相液体培养基阳性率比直接接种法高1倍多。该培养基阳性检出率高的主要原因有：做到标本及时接种（床边接种），而直接接种（传统方法）从采样到接种耗时较长，尤其不能及时接种时，易造成某些细菌死亡，影响培养结果。标本接种量大，约3 ml，而直接接种法标本量少，约10 μl。双相液体培养基固相可以分离细菌，液相具有增菌作用，其营养成分丰富，适宜大部分细菌快速生长。每天8时、11时、15时、18时四次充分混匀，及时接种，有利于细菌快速生长，提高检出率。

    表1显示：该培养基阳性检出时间，24 h内检出阳性数占95％，24 h～48 h内检出阳性数5％，于直接接种法阳性检出基本一致，与仪器血培养仪作体液标本培养相比检出时间快一倍［3］。因为仪器阳性报警后，需要转种分离分纯18 h～24 h后才长出细菌。

    278份标本在双相液体培养基内检出40株21种细菌，尤其是检出苛养菌，还培养出既往用直接接种法很少培养出的少见菌，说明培养基适合多种细菌生长。从表2检出细菌构成比的情况看，前三位是肠杆菌科细菌（37.5％）、葡萄球菌属（20.0％）、非发酵菌（15.0％），与文献报道一致［4，5］。

    此法从采样到培养操作简单，由医生直接接种，标本送实验室，不需转种平板，直接放入孵育箱培养，固相长出菌后可作鉴定药敏，48 h未见细菌生长可发阴性报告。

综上所述，双相液体培养基能做到体液标本及时接种，操作简单，节省时间，阳性检出率高，结果快速准确，双相液体培养基检测法是快速诊断患者细菌感染的一种较好的方法。

 

 作者：王升，张红升 《实用医技杂志》

【参考文献】

  　　［1］叶应妩，王毓川.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997：437575.

　　［2］张卓然，倪语星.临床微生物学和微生物学检验［M］.第3版.北京：人民卫生出版社，2006，278.

　　［3］张智洁,孙继梅,刘勇.应用VITAL-200全自动血培养仪.进行血液及无菌体液培养的临床评价［J］.中华医院感染学杂志,2002,12(1):7778.

　　［4］蒋燕群,卫国,倪语星.应用全自动血培养仪提高血液、无菌体液培养阳性率［J］.中华医学检验杂志,1999,22（2）：7173.

［5］王湛.使用双相血培养瓶进行临床血液及无菌体液培养结果分析［J］.河北医药,2001,23(1):5152.