【摘要】  目的：了解大肠埃希菌产ESBLs的状况及对常用抗生素的药敏情况。方法：用纸片法检测ESBLs。药敏试验采用KB琼脂扩散法。结果：从本次试验中的400株大肠埃希菌中，ESBLs检出率为61.50%（246/400），其中2005年组ESBLs检出率为52.94%（90/170），低于2006年组的67.83%（156/230），而在药敏试验方面仅2.5%（10/400）对任何抗生素没产生耐药，耐两种或两种以上抗生素的占95.00%（380/400）。结论：临床要有计划地使用各种抗生素类药物，防止更多的ESBLs阳性菌株的形成。

【关键词】  大肠埃希菌；超广谱β内酰胺酶；药敏分析

   大肠埃希菌是医院临床标本中分离的常见细菌［1］，由于现时各种抗生素的广泛应用，甚至是滥用，使大肠埃希菌对各种抗生素的敏感率不断下降，据相关文献报道［2］，大肠埃希菌对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松等应用广泛的抗生素敏感率分别为86.5%、45.8%、40.3%，并且有逐年下降的趋势。另据其他文献报道［1］，大肠埃希菌对哌拉西林和头孢哌酮的耐药率为40.4%和23.0%，而对哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均为0，显而这些耐药的产生，与大肠埃希菌产ESBLs不无关系。为此，我们对本院临床不同时间分离到的400株大肠杆菌进行ESBLs检测，并了解该菌对各种抗生素的耐药性，以及对各种抗生素耐药性的变迁，以指导临床对抗感染用药。

　　1  材料与方法

　　1.1  菌株来源 

　　试验菌株分别为2005年1月至2005年12月（下文简称为“2005年组”）和2006年1月至2006年12月（下文简称为“2006年组”）我院住院及门诊患者非大便标本分离的大肠埃希菌400株。

　　1.2  菌株鉴定 

　　按《全国临床检验操作规程》进行，分离培养得到的菌株用美国DADE公司生产的MicroWalkAway-40全自动微生物分析仪进行鉴定。

　　1.3  质控菌株 

　　分别以大肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603作为ESBLs试验阴性和阳性的菌株。

　　1.4  药敏试验 

　　采用KB 法,MH 琼脂培养基。药敏纸片：阿米卡星、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑啉、环丙沙星、亚胺培南、哌拉西林、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、复方新诺明，以上药物均为英国OXOID公司生产，经室内质控符合要求，并在有效期内使用。所有的判定结果按CLSI／NCCLS(临床实验室标准研究所Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)2005版的规定［3］。

1.5  ESBL检测方法 

　　药敏纸片初筛和确证试验按CLSI／NCCLS推荐进行测定，CAZ ≤22 mm ,CTX ≤27 mm ,AZT ≤27 mm ,CFP ≤24 mm ,其中1 种药敏结果符合此值时,该菌需做确证试验。含克拉维酸与不含克拉维酸抗生素纸片间抑菌区直径≥5 mm 可判为ESBLs阳性,质控菌抑菌区直径增大≤2 mm。

　　2  结果

    从本次试验中的400株大肠埃希菌中，ESBLs检出率为61.50%（246/400），其中2005年组ESBLs检出率为52.94%（90/170），低于2006年组的67.83%（156/230），而在药敏试验方面仅2.5%（10/400）对任何抗生素没产生耐药，而耐两种或两种以上抗生素的占95.00%（380/400），具体见表1。表1  400株大肠埃希菌对17种常用的抗生素的耐药率比较(略)

　　3  讨论

    超广谱β内酰胺酶是一类能水解青霉素、头孢菌素类及单环β2内酰胺类抗生素、能被β内酰胺酶抑制剂抑制的β内酰胺酶。ESBLs细菌的β内酰胺酶基因位于质粒上,通过转化、转导、转座、接合转移和整合方式,将耐药性在不同细菌中传播,容易造成耐药细菌的流行 。ESBLs 主要存在于KPN和ECO 中。ESBLs是一种由质粒介导的，能够令细菌对多种β内酰胺类药物产生耐药，能被β内酰胺酶抑制剂（如克拉维酸等）抑制的一种丝氨酸蛋白酶。目前随着β内酰胺类抗生素的广泛应用，对各种细菌均形成一个高的β内酰胺类药物的抗生素压力，使大量的耐药基因定位到质粒上，并令耐药菌株被选择出来，使大多数细菌通过耐药质粒而获得对β内酰胺类药物耐药性，对临床控制感染应用β内酰胺类药物造成一定的威胁。

    本文显示ESBLs检出率为61.50%（246/400），ESBLs（+）的大肠埃希菌仅对亚胺培南没有产生任何耐药外，只有阿米卡星、头孢西丁的耐药率比较低，分别为1.2%和4.47%，对其他抗生素的抗生素的耐药率均超过50%。而ESBLs(-)的大肠埃希菌除对亚胺培南没有产生任何耐药外，头孢他啶也没有产生任何耐药，此外对氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、氨曲南、头孢曲松、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑啉、头孢呋肟产生耐药都均在20%以下。根据CLSI／NCCLS规定,对ESBLs 菌株,应报告对所有青霉素类、头孢菌素类和氨曲南耐药。

    从本文显示，本院2005年组ESBLs(+)和2006年组ESBLs(+)及2006年组ESBLs(-)和2006年组ESBLs(-)对比中除氨苄西林/舒巴坦和复方新诺明外，其他各种抗生素的耐药率不断程度的上升，其中ESBLs（+）组以庆大霉素耐药率上升较为明显，由2005年的12.82%上升到2006年的53.33%，而ESBLs(-)组则以头孢噻吩耐药率上升较为明显，由2005年的6.76%上升到2006年的26.67%。

    本文显示，本院ESBLs(+)和同期ESBLs(-)对比中，ESBLs(+)对除亚胺培南外的各种抗生素耐药率均远远高于同期的ESBLs(-)的大肠埃希菌。

从本次试验结果来看,由于大肠埃希菌ESBLs(+)率不断升高,故此,对于怀疑为由大肠埃希菌感染造成的危重患者应建议临床医生使用含β内酰胺酶抑制剂的抗生素或使用亚胺培南。另外,由于细菌产生耐药,与大量在各行业使用抗生素有密切的关系,故此,及早了解各患者分离株的药敏试验结果,建议临床有效并合理用药,这将更有利于临床对单—患者的感染治疗,也将更有利于控制细菌对各种抗生素的耐药率上升,也对防止细菌产生新的耐药性有重要意义。

 

作者：陈月燕，席云，曲彩红，谭泳泉  《实用医技杂志》

【参考文献】

［1］李家泰，李耘，齐慧敏.2002年至2003年中国革兰阴性细菌耐药性检测研究［J］.中华检验医学杂志，2005，28（1）：1929.

［2］王辉，陈民钧，倪语星，等.2003年至2004年中国十家教学医院革兰阴性杆菌的耐药分析［J］.中华医学检验杂志，2005，28（12）.　　

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute/NCCLS. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, Fifteenth informational supplement. CLSI/NCCLS document M100S15［S］.Clinical and Laboratory Standards Institute Wayne Pennsylvania,2005,25(1):1167.