摘要：目的探讨湿生扁的体外抑菌作用。方法用KB纸片扩散法和生长速率分别研究了湿生扁蕾对细菌和真菌的抑制作用。结果湿生扁蕾的提取物和各部位对供试菌都有一定的抑制作用，其中对辣椒疫霉的抑制作用最强；氯仿部位的抑菌作用则最好。结论湿生扁蕾在体外有明显的抑菌作用。

　　关键词：湿生扁蕾；  抑菌作用

　　Studies of the Antimicrobial Activity of Gentianopsis paludosa

　　　Abstract:ObjectiveTo study the antimicrobial activity of Gentianopsis paludosa.MethodsKB paper diffusion and mycelial growth rate methods were used to determine antibacterial activity, respectively.ResultsThe ethanol extraction and fractions of Gentianopsis paludosa showed inhibitory effects on the tested microbe,and the inhibitory effect on Phytophthora capsici was the strongest. Futhermore,the chloroform fraction showed the best activity.ConclusionGentianopsis paludosa has significant antimicrobial activity.

　　Key words:Gentianopsis paludosa;  Antimicrobial activity

   

　　湿生扁蕾Gentianopsis paludosa Ma为龙胆科扁蕾属植物，具有清热解毒的功效，主治急性黄疸肝炎、结膜炎、高血压病、急性肾盂肾炎、痔疮肿毒、肠胃炎、腹泻等。藏医用全草治疗流行性感冒及胆病引起的发烧［1，2］。虽然湿生扁蕾在民间的药用价值很大，但关于其生物活性的研究却很少。因此，我们对湿生扁蕾活性进行了研究，为其开发利用提供科学的依据。

　　1  材料

　　以下菌种均为本实验室保存。细菌：枯草芽孢杆菌，白菜软菌病菌，柑桔溃疡菌，金黄色葡萄球菌。真菌：毛霉，辣椒疫霉，玉米大斑病菌，番茄早疫病菌，烟草炭疽。琼脂粉购于北京奥博星生物技术责任有限公司。湿生扁蕾采自青海，由西北高原生物研究所张宝琛研究员鉴定为Gentianopsis paludosa Ma。

　　2  方法

　　2.1  湿生扁蕾乙醇提取物及各部位的制备湿生扁蕾用75%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压蒸馏得粗提物。粗提物悬浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反复萃取，减压蒸馏得到石油醚部位，氯仿部位，正丁醇部位，水部位。

　　2.2  药液的制备抑制细菌的药液：分别取湿生扁蕾粗提物（E），石油醚部位（P），氯仿部位（C），正丁醇部位（B），水部位（W）适量溶于DMSO中配成20 mg/ml的药液备用。抑制真菌的药液：分别取湿生扁蕾粗提物，各部位适量加到灭菌后的PDA固体培养基中，配成不同浓度的悬浊液。

　　2.3  KB纸片扩散法制备LB培养基［3］，将上述细菌菌种在LB液体培养基中活化后，以无菌操作用移液枪移取致平铺到平板表面，将在药液中浸泡过的滤纸片（直径6 mm）贴到培养基上，用DMSO浸泡过的滤纸片作为对照。在温箱中培养24 h（金黄色葡萄球菌在37℃下培养），观察并测量抑菌圈直径。

　　2.4  生长速率法制备PDA培养基［3］，将不含药物的，含药物的培养基分别平铺在夹板上，上述真菌菌种活化后，在无菌条件下，将供试菌种用直径6 mm的打孔器打出一定数量的菌饼。将菌饼移至培养基上，菌丝面朝下，每皿中央放一块菌饼，置28℃温箱中培养。将不含药物的培养基作为对照。待对照皿中菌落长满皿时，测量其余处理的菌落直径，求出抑菌率。

　　抑制率=对照皿中菌落直径处理皿中菌落直径     对照皿中菌落直径打孔器直径直径×100%

3  结果

　　3.1  湿生扁蕾对细菌的抑制作用从表1中可以看出，除了枯草芽孢外，湿生扁蕾75%的乙醇提取物、氯仿、石油醚、正丁醇对其它3种细菌都有抑制作用，对柑桔溃疡的作用最显著。而氯仿部位的活性要好于其他部位。水部位只对柑桔溃疡有作用。DMSO对细菌无作用。

　　表1  湿生扁蕾对细菌的抑制作用（略）

　　3.2  湿生扁蕾对真菌的抑制作用湿生扁蕾提取物对所测的真菌都有抑制作用，且对辣椒疫霉的作用最强。结果见表2。EC50（mg/ml）分别为0.967，0.297，0.941，2.985，0.562，0.839。对湿生扁蕾的部位只测定了对毛霉和辣椒疫霉的作用，从表3中可以看出，石油醚和氯仿部位的作用比较明显，且对辣椒疫霉的作用比对毛霉要强。在1.0 mg/ml时，氯仿部位对辣椒疫霉的抑制作用达到了95%。

　　表2  湿生扁蕾75%乙醇提取物对真菌的抑制作用（略）

　　表3  湿生扁蕾各部位对真菌的抑制作用（略）

　　4  讨论

从以上结果可以看出，湿生扁蕾对供试菌都有一定的抑制作用（枯草芽孢除外），且对辣椒霉的作用最强；氯仿部位的抑菌效果最好。供试菌中除金黄色葡萄球菌外都为植物致病菌，这就提示了湿生扁蕾对一此植物致病菌有一定的抑制作用。本实验为扩大湿生扁蕾的应用提供了科学依据，使其开发更具有广阔的前景。

 

作者：王焕弟，谭成玉，白雪芳，杜昱光，林炳承 《时珍国医国药》

　　参考文献：

　　［1］  张宝琛，甄润德，胡柏林，等.湿生扁蕾化学成分的研究［J］.中草药，1980，11（4）：149.

　　［2］  屠兰英，曹长年，赵启英.正交设计法研究湿生扁蕾药效成分的优化提取工艺［J］.青海师范大学学报（自然版），2005，1：69.

     ［3］  方中达.植病研究方法［M］.北京：中国农业出版社，1996：46.