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复方野马追胶囊的体内抑菌抗病毒实验研究



录入时间:2011-1-4 9:47:32 来源:中国论文下载中心

【摘要】    目的 观察复方野马追胶囊的体内抑菌及抗副流感病毒作用。方法采用体内实验,观察复方野马追胶囊对链球菌感染小鼠的保护作用;以副流感病毒感染小鼠,观察实验中小鼠生存时间、死亡率及肺指数和肺组织病变程度。结果复方野马追胶囊体内有明显的抑菌和抗副流感病毒作用,能明显降低链球菌感染小鼠的死亡率,明显延长副流感病毒感染小鼠的生存时间,显著降低肺指数,减轻肺组织病变程度。结论复方野马追胶囊体内有明显的抑菌和抗副流感病毒作用。
【关键词】  复方野马追胶囊; 链球菌; 副流感病毒
  Abstract:ObjectiveTo study the antibacterial and antiviral effect of Fufangyemazhui Capsule in vivo. MethodsThe death rate in streptococcus affected mice treated with Fufangyemazhui Capsule was observed. The influences on life time, death rate and lung index of mice infected by parainfluenza virus were observed. ResultsFufangyemazhui Capsule obviously  decreased the death rate of mice infected by streptococcus and remarkably prolonged life time, decreased lung index and inhibited the lung consolidation of mice infected by parainfluenza virus. ConclusionFufangyemazhui Capsule has antibacterial and antiviral effect on parainplueuza virus.
  Key words: Fufangyemazhui Capsule;  Streptococcus;  Parainfluenza virus
    复方野马追胶囊为江苏省中医药研究院根据临床经验方研制的治疗流行性感冒的中药复方制剂,其主药为野马追。野马追为菊科植物轮叶泽兰Eupatorium lindleyanum DC.的干燥地上部分,此药材在历代本草中均没有记载,但却是苏北民间久已沿用的清热解毒药。本院科研人员前期对野马追药材的活性成分及药理作用进行了系统研究,发现其对于多种病毒在体内外均显示良好的抗病毒作用,且动物实验证实此药材具有明显的镇咳祛痰功效。在大量前期实验研究的基础上,根据我院名中医的临床经验方,我院研制了用于治疗流感的中药新药复方野马追胶囊。本文对中药制剂复方野马追胶囊的体内抑菌和抗副流感病毒进行了实验研究,为此新制剂进入临床提供实验依据。
  1  材料
  1.1  供试品供试药物:复方野马追胶囊(干粉),每克含生药材量为13.67 g, 批号060310,江苏省中医药研究院提供,临用前以蒸馏水配制成所需浓度的混悬液。阳性对照药利巴韦林片(国药准字H19999460,批号0506262),扬州中宝制药有限公司产品;阿莫西林胶囊(Amoxicillin,Amo),山东鲁抗医药集团鲁原有限公司产品,国药准字XF19992098,批号L041104。临用前以蒸馏水配制成所需浓度的混悬液。小柴胡冲剂,杭州尖峰德康药业有限公司产品,国药准字Z33020926,批号051004。
  1.2 实验菌CMCC32171链球菌,由中国药科大学微生物学教研室提供。
  1.3 病毒副流感病毒(仙台株)尿囊液,由中国药科大学微生物学教研室提供。
  1.4 细胞狗肾传代细胞(MDCK细胞株)由中国药科大学微生物学教研室保存,以含15%小牛血清的DMEM培养液传代。
  1.5 动物KM小鼠,♀♂各半,清洁级,购于上海斯莱克实验动物有限责任公司,合格证号:SCXK(沪)2003-0003。饲养环境为清洁级,合格证号:SYXK(苏)2002-0007。
  2 方法与结果[1~5]
  2.1  体内抑菌实验
  2.1.1  药液配制方法 临用前用蒸馏水配成含生药量为0.4,0.2,0.1 g/ml的混悬液供小鼠灌胃用,给药体积为20 ml/kg,即给药剂量为8.0,4.0,2.0 g生药/kg体重。
  2.1.2  感染菌液制备取生长良好的链球菌,肉汤培养6h,离心,沉淀以5%酵母混悬液稀释至所需浓度,供腹腔注射染菌用。菌液浓度经预试验确定,小鼠ip菌液 0.1 ml/10 g的最小致死量(100% MLD)为1.2×107 cFu/ml。
2.1.3  抑菌实验结果小鼠120只,雌雄各半,空腹称重,随机分为6组,模型对照组、复方野马追胶囊8.0,4.0,2.0 g生药/kg组、阿莫西林胶囊100 mg/kg组、小柴胡冲剂5.0 g/kg组。各组分别灌胃给药, 给药体积为0.2 ml/10 g,给药后1h腹腔染菌:ip菌液(1.2×107 cFu/ml)0.1 ml/10 g。第1次给药后12 h,各组按上述剂量再给药1次。观察染菌后24 h内各组小鼠的死亡情况。结果见表1。
由表1可见,复方野马追胶囊大、中、小剂量组小鼠感染链球菌后24 h内死亡率均比对照组明显降低,大剂量组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05)。表明复方野马追胶囊对链球菌感染小鼠具有一定的保护作用。表1  复方野马追胶囊对链球菌感染小鼠的影响(略)
  2.2  复方野马追胶囊对副流感病毒感染小鼠的死亡保护作用取健康KM小鼠100只,♀♂各半,随机分为7组:复方野马追胶囊8.0 g生药/kg组、复方野马追胶囊4.0 g生药/kg组、复方野马追胶囊2.0 g生药/kg组、利巴韦林100 mg/kg组、小柴胡冲剂5 g/kg组、病毒对照组及正常对照组。病毒感染方法:小鼠ip 30 mg/kg戊巴比妥钠 0.1 ml/10 g体重,麻醉后于鼻腔内接种相当于2~5 倍LD50的含副流感病毒的鸡胚尿囊液0.03 ml/只。
    给药方法:各给药组于病毒感染前2 h ig 1次,以后2次/d,给药体积0.2 ml/10 g,共给药5 d。病毒对照组及正常对照组按同法给予等体积蒸馏水。
   
  自病毒感染后连续观察15 d,逐日观察并记录小鼠发病和死亡数,计算死亡率、死亡保护率、平均存活天数及生命延长率。结果见表2。表2  复方野马追胶囊对小鼠副流感病毒感染死亡保护作用(略)
  由表2结果可见,复方野马追胶囊对副流感病毒引起肺炎的小鼠有保护作用,能明显延长感染小鼠的生存时间,以8.0 g生药/kg剂量组的统计学差异最为显著。
  2.3   复方野马追胶囊对副流感病毒感染小鼠肺指数的变化及肺病变程度的影响实验分组方法、染毒及给药方法都同死亡保护实验。感染后第6天,禁食4 h,称体重。处死小鼠,取出全肺,用生理盐水洗净,并用干净滤纸吸掉残余盐水,称肺重。计算肺指数(每 100 g 体重的肺质量 ,即肺指数 = 肺质量/ 体重×100)和肺指数抑制率(%)= (病毒对照组平均肺指数 - 实验组平均肺指数)/ 病毒对照组平均肺指数 ×100 % ,与对照组比较进行组间 t 检验(见表3)。另取肺组织,福尔马林固定,HE染色,进行病理检验。表3 复方野马追胶囊对小鼠副流感病毒感染肺指数影响(略)
  由表3结果可见,复方野马追胶囊大剂量组(8.0g生药/kg)对小鼠副流感病毒引起的肺炎有明显的治疗作用,能显著降低肺指数(P<0.05~0.01)。病理组织学检查结果表明,副流感病毒肺炎模型感染成功。主要表现为支气管炎、间质性肺炎和肺脓肿形成。复方野马追胶囊具有抗副流感病毒所致肺部感染疾病的作用。其中复方野马追胶囊高剂量组形态与利巴韦林组接近。病理照片见图1~7。
 
  3  小结
    江苏地产药材野马追是菊科(Compsitae)植物轮叶泽兰(Eupatorium lindleyanum)的干燥地上部分。花盛期采收,除去杂质,晒干。野马追有化痰止咳、清热解毒、利尿消肿、降压的功能,用于感冒、咳嗽多痰、头疼、扁桃体炎、菌痢、高血压病。其总黄酮与总生物碱有镇咳作用;生物碱对豚鼠离体回肠有明显松弛作用,还具降压功效;黄酮类化合物能增高白细胞数;乙醇与乙醚提取部分对离体回肠有显著的抗组胺作用;100%煎液可分别抑制流感杆菌、甲型链球菌、金黄色葡萄球菌及卡他球菌。野马追地上部分含挥发油0.024%,茎叶为0.025%,花为0.078%。此外含黄酮类、生物碱类、香豆素类、倍半萜内酯类等成分[6]。野马追曾收入《中国药典》(1977年版),收入江苏省地方药材标准(1988年)。早在1971年,江苏省卫生厅组织“野马追”科研协作组,开展对野马追有效成分的提取分离、化学分析、药理、临床等方面的研究工作,获得了较好的成果,并进一步研制成野马追片剂、野马追糖浆等制剂应用于临床,取得了良好的临床疗效。江苏省中医药研究院科研人员于2002年开始对野马追的化学成分、药理功效进行了一系列的深入研究,并在此基础上,采用现代中药提取手段和制剂工艺将本院名中医的临床经验方研制成为复方野马追胶囊。
根据实验结果可见,复方野马追胶囊灌胃给药对链球菌感染小鼠有明显保护作用,而且对小鼠副流感病毒引起的肺炎有明显的治疗作用,能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺指数,并减轻肺组织病变程度。这为本品的临床疗效提供了丰富的实验依据,并为进一步进行临床研究打下了坚实的基础。
作者:彭蕴茹,窦洁,黄芳,钱大玮《时珍国医国药》
【参考文献】
    [1]徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2002:1664,1740.
  [2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994:278.
  [3]H.G. 沃格尔,杜冠华,李学军,等.药理学实验指南-新药发现和药理学评价[M].北京:科学出版社,2001.
  [4]杨家民,王树荣.克感滴鼻剂对动物药效作用的观察[J].时珍国医国药,2004,15(4):208.
  [5]丁泰永,金春峰.柴胡桂枝汤治疗流感病毒感染小鼠的实验研究[J].辽宁中医学院学报,2004, 6(3). 230.
[6]国家中医药管理局.中华本草[M].上海:上海科技出版社,1999:6876.

 

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