大肠杆菌是人和动物肠道的正常菌群，并广泛分布于自然界中，除部分具有致病性外，大多数属于正常菌群，近2年我们在腹泻患者粪便中分离出引起致泻的H2S阳性的大肠杆菌，就此我们进行了系统鉴定，现将鉴定结果介绍如下。以供参考。

    1  材料与方法

    1.1  材料来源  所采检样来源于新疆乌鲁木齐市第一人民医院儿童分院腹泻病门诊，按常规法采样送检。

    1.2  实验用培养基和诊断血清  S.S琼脂、伊红美兰琼脂均由上海医学化验所提供。水解酪蛋白琼脂、生化试验培养基均由浙江省军区后勤部卫生防疫检验所提供。

    双糖铁培养基由卫生部上海生物制品研究所提供。试验前按2%的尿素、1%的蔗糖量分别加入双糖铁半固体培养基内，制成三糖铁尿素半固体培养基斜面备用。

    药物敏感试验纸片由北京天坛药物生物技术开发公司提供。

    沙门菌属诊断血清、致病性大肠艾希菌诊断血清均由卫生部成都生物制品研究所提供。

    实验用对照菌株选用地方株200020(O111：K58)大肠杆菌；药物敏感试验菌株选用ATCC 25922。

    1.3  方法  待检样品的分离检验程序均按常规法进行，将患者粪便标本直接划种于伊红美兰琼脂和S.S琼脂平板上，置37℃温箱培养24h后观察。

    2  结果与分析

    2.1  形态学分析  按上述方法进行分离划种，置37℃温箱培养24h后在伊红美兰琼脂平板上生长出边缘整齐、湿润、红色的菌落。S.S琼脂平板上生长出红色且中心产H2S的菌落，该菌在两皿上均呈现为优势菌落。将上述特征的菌落挑取若干个穿刺接种于三糖铁尿素半固体培养基斜面上，置37℃温箱培养18～24h后，反应为典型的大肠艾希菌的初步生化反应：发酵葡萄糖产酸产气、分解乳糖、尿素酶阴性、动力阳性。所不同的是产生硫化氢，对该典型菌落进行了涂片染色后，镜下观察为革兰阴性无芽孢小杆菌。

2.2  血清学试验  采用沙门菌属诊断血清和致病性大肠艾希菌诊断血清对待检菌株进行了玻片凝聚试验，两属血清均未发现凝聚现象。

    2.3  生化试验  在初步生化试验的基础上对该菌进行了大生化试验，其结果也符合大肠艾希菌的生化反应(见表1)。表1  待检菌的生化反应

    2.4  药敏试验  我们对待检菌进行了药敏试验，结果对庆大霉素、痢特灵、复方新诺明，氟哌酸敏感，对青霉素、红霉素、强力霉素均有不同程度的耐药。

    2.5  毒力试验(小白鼠腹腔注射法)  将待检菌株转种于肉汤培养基中置37℃培养24h后，取0.5ml肉汤培养物加入另一支4.5ml的肉汤培养管中置37℃培养2h后，按不同量稀释(2h培养物、10倍倍比稀释2个浓度)后注射于小白鼠腹腔内，以每2只为一试验平行组，共注射三组，每只按0.5ml量注射，同时设有2只作为阴性对照组，注射3h后各试验组小白鼠均开始出现不同程度的发病症状，腹泻，四肢无力，精神萎糜，尤其是高浓度注射组发病明显，注射5h后即死亡，其他各组也于24h内相继死亡。证明该菌具有致病力。

    3  讨论

    血清学试验是细菌学鉴定工作中常用的方法之一，此次试验中我们采用沙门菌属诊断血清和致病性大肠艾希菌诊断血清对待检菌进行了血清学试验，两属血清均未发现凝聚现象，如仅从血清学试验上分析并不能支持我们的判定，但在进一步的毒力试验中证明该菌确定可导致发病，无疑是引起腹泻的病原菌。除H2S阳性与大肠杆菌不符外，其他生化试验结果均具有大肠杆菌的生化特性。综合以上试验，无论从形态学和常规的生化反应以及毒力试验结果分析，都与大肠杆菌相符，因此我们认为该菌是大肠杆菌。

近年来也有过H2S迟缓阳性的大肠杆菌［1］的报道，但在我区还是首次发现，该菌株与相应的诊断血清均不发生凝聚，但在生化反应上又极具备大肠艾希菌的特性，是否与菌株本身产生H2S有直接影响，笔者认为有必要对此特性进行研究，对H2S所能产生的毒力及对表型特征的干扰等应做一分析，对菌株是否自身发生变异以及其他特性所致，也有待于进一步探讨。

作者：高涛 高涛 阿衣夏木 于烽 远雪梅 《中华医学研究杂志》

【参考文献】
  1 陈霞, 牟怀德, 左金蓉,等. 中国卫生检验,2000,10(1): 74.

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