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临床酵母样真菌快速鉴定及药敏实验方法的研究



录入时间:2010-12-15 9:30:09 来源:中国论文下载中心

 

 [摘  要] 目的:建立一种临床酵母样真菌快速鉴定和药敏试验方法。方法:采用珠海丽拓公司生产的真菌分离鉴定检测试剂盒,对临床感染真菌标本和酵母样真菌标准菌株进行鉴定,并与法国梅里埃真菌鉴定系统进行对照。结果:6株酵母样真菌标准菌株鉴定符合率为100%,115株临床标本两种试剂鉴定符合率为92.55%,药敏结果显示临床标本对咪唑类抗真菌药物出现较高的耐药性,值得临床重视。结论:本研究所采用方法操作简便,特异性较好,便于临床酵母样真菌标本的常规鉴定。

    [关键词] 酵母样真菌;快速鉴定;药敏试验

    在临床上,由于广泛使用抗生素、免疫抑制药物及开展移植手术等因素,致使真菌感染越来越多。而各种抗真菌药物的滥用,更加剧了真菌感染的复发和增加了治疗的难度。近年来的研究发现造成真菌感染的大部分是酵母样真菌。因此,对临床上建立快速酵母样真菌分离培养、鉴定和药敏试验显得尤为重要[1]。目前,临床真菌分离培养、鉴定和药敏试验大多分开进行,要花较多的时间和人力物力,影响临床诊断。为此,笔者对酵母样真菌的快速分离培养、鉴定和药敏试验同时进行的方法学进行了探讨研究,报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  真菌标准菌株  6株分别是:白色念珠菌1株(编号为CMIDC.1c),热带念珠菌1株(编号为CMIDC.2a),光滑念珠菌1株(编号为CMIDY.10),克柔念珠菌1株(编号为CMIDY.6c),季尔蒙念珠菌(编号为CMIDC.5b),新生隐球菌(编号为CMIDD.2b),购自中国医学科学院皮肤病研究所(南京)。

    1.1.2  临床标本  20032月至20052月,在本院门诊和住院病人中采集。

    1.1.3  对照用API20C鉴定系统  采用法国生物梅里埃产品。

    1.1.4  真菌分离、鉴定检测试剂盒,购自珠海市丽拓发展有限公司。

    1.2  方法

    1.2.1  标准菌株制备  在无菌条件下从真菌标准菌株保存斜面中,用巴氏接种环接种到改良的沙氏琼脂平板上,30 培养24 h~48 h,再转种活化一代备用。

    1.2.2  临床标本的准备  把标本先接种到改良的沙氏琼脂培养基中,30 培养24 h~48 h,再转接活化一代后备用。

    1.2.3  菌型鉴定  从制备好的标准菌株和临床标本分离平板中,分别挑取1~3个直径大于1 mm拟似菌落,加入到鉴定培养基中,混匀。分别取150 μl加入到检测板的A2~A5,B1~B5鉴别微孔中。

1.2.4  药敏试验  从混有菌落的鉴定培养基中取100 μl菌悬液,加入到药敏培养基中,混匀后分别取150 μl加入到检测板的A6~A12,B6~B12微孔中。

    1.2.5  结果判断  将检测板放入湿盒中,30 培养20 h~24 h,B1孔出现明显浑浊时,各微孔加入显色液1滴(B5孔除外),继续培养2 h~4 h观察结果,结果判读参照说明书。

    1.2.6  API20C操作按说明书进行。

    2  结果

    2.1  标准菌株鉴定结果  两种试剂对6株标准菌株检测完全一致,见表1。

    酵母样真菌标准菌株的鉴定结果菌株(略)

    3  讨论

该实验方法集真菌药敏和鉴定于一体,较传统的药敏和鉴定方法节省时间在24 h以上,有利于临床早期判断,早期治疗的原则。本研究发现在真菌药敏和鉴定中,标准菌株及临床标本分离株的活化和接种量对结果有一定的影响。菌株活化以二代左右为宜,以便获得生长力旺盛的纯菌落,同时发现鉴定实验的接种量在104 cfu/ml~105 cfu/ml为宜。药敏试验接种量应控制在103 cfu/ml左右,过高、过低接种量都不利于结果判断。在药敏试验中发现临床感染真菌对咪唑类抗生素出现较多的耐药性[2],提示与近期临床上大量使用该类抗生素而引起耐药菌株增加有关,值得临床注意。近年来,真菌感染特别是酵母类真菌感染明显增加。随着抗真菌药物数量的增多和耐药真菌的出现,临床上迫切需要对真菌进行鉴定和药敏实验[2]。在国内现有产品中,还没有把真菌鉴定和药敏试验在一个检测板上,同时进行快速检测试剂盒,本实验采用试剂是利用真菌的特殊生化反应和酶反应,用活细胞线粒体酶特征显色剂,对真菌进行快速鉴定和药敏试验,改变了过去通过观察浊度来判断结果的方法,显色反应鲜明,操作简便,判断准确,是一种比较先进的技术方法,值得推广[4]。

作者:肖晋《实用医技杂志》

    参考文献:

1  王文莉,郑玮清,李若瑜,等.采用NCCLS M27A方案微量法检测念珠菌对抗真菌药物的敏感性[J.中国检验医学杂志,2001,242):107108.   
   
2  王慧.243株真菌感染菌株的耐药性分析[J.山东医药,2004,1820):5051.   

3  刘先宁.眼部常见酵母样菌的快速鉴别及药敏实验方法的建立[J.现代检验医学杂志,2003,182):3435.

4  Tellier R, Krajden M, Grlgorie WGA, et al.Innovative endpoint determination system for antifungal susceptibility testing of yeastsJ. Antimicrob Agents Chemother, 1992, 36(8):16191625.

 

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