银河澳门官网入口,银河集团网址登录

银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->细菌基本知识和检测方法->短小芽孢杆菌作试验菌测定四环素类抗生素效价

短小芽孢杆菌作试验菌测定四环素类抗生素效价



录入时间:2010-12-6 9:45:30 来源:《西北药学杂志》

摘要 采用管碟法,测定短小芽孢杆菌对四环素类抗生素的敏感度,并与藤黄微球菌进行比较。结果概率分析表明,两种试验菌测定的效价无显著差异,表明短小芽孢杆菌法优于中国药典1995年版方法。
  四环素类抗生素(土霉素、金霉素、四环素等)微生物检定法采用的试验菌种,各国药典规定不一。英国药典1采用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),美国药典2采用金黄葡萄球菌(Staphylococcus aureus),日本标准3与中国药典4均采用藤黄微球菌(Micrococcus lutea)。鉴于以藤黄微球菌作试验菌存在诸多缺点(菌种容易变异、培养时间长、抑菌圈边缘欠清晰、测定结果误差大),而英美两国药典所收载的色谱法1,2在我国目前又难于普及,本文试用短小芽孢杆菌作为四环素类抗生素效价测定的试验菌种,并获较满意结果。
  1 材料
  1.1 药品 四环素类抗生素(西安药厂、光华药厂及福州抗生素厂等,包括原料药、片剂、软膏);四环素类抗生素标准品(中国药品生物制品检定所)。
  1.2 实验菌株 短小芽孢杆菌〔CMCC(B)63202(按中国药典1995版二部附录72页方法制成透光率为25%的菌液);藤黄微球菌〔CMCC(B)28001(制成透光率为20%的菌液)。
  1.3 培养基 号培养基pH 7.88.0,号培养基pH 6.6(中国药品生物制品检定所)。
  1.4 磷酸盐缓冲液 pH6.0缓冲液(KH2PO4 8 g,K2HPO4 2 g,加水至1L;pH8.0缓冲液(KH2PO4 0.523 g,K2HPO4 16.73 g,加水至1L);pH 4.5缓冲液(KH2PO4 13.6 g,加水至1L)。
  2 方法
  采用短小芽孢杆菌:一剂量法5测定四环素与土霉素效价的标准曲线剂间比例为1∶0.8,中心浓度为8 u/ml,浓度范围为420 u/ml。二剂量法4高低剂量分别为8,4 u/ml。一剂量法测定金霉素效价的标准曲线剂间比例为1∶0.8,中心浓度为1 u/ml,浓度范围为0.2510 u/ml。二剂量法高低剂量分别为1,0.5 u/ml。
  采用藤黄微球菌:标准曲线制备同中国药典1977年版,二剂量法按中国药典1995年版操作。
  2 结果
  2.1 抑菌圈 采用pH6.0磷酸盐缓冲液及号培养基,短小芽孢杆菌的抑菌圈清晰度较好。按2%3%比例将短小芽孢杆菌液加入培养基作为菌层,35℃37℃的条件下培养1416 h,所得到的抑菌圈大小较为合适(1)。
1 短小芽孢杆菌测定抑菌圈直径(mm)

样品

菌液加入量(%)

高剂量

低剂量

四环素

2

22

19

土霉素

2

21

18

金霉素

3

20

17

2.2      试验菌测定的标准曲线 见表2。

 2 两种试验菌标准曲线斜率

样品

短小芽孢杆菌

藤黄微球菌

四环素

1.67

1.41

土霉素

1.13

1.18

金霉素

1.36

1.49

2.3      两种试验菌测定的效价 表35。 

3 两种试验菌测定土霉素效价对比

样品*

序号

短小芽孢菌

藤黄微球菌

差值

片剂(%)

1

72.3

73.9

1.6

2

93.6

93.1

0.5

3

69.2

69.5

0.3

4

98.3

100.1

1.8

5

82.2

79.7

2.5

6

95.4

93.1

2.3

7

81.3

82.6

1.3

8

81.9

81.5

0.4

9

92.0

91.0

1.0

10

101.9

102.8

0.9

原料(u/mg)

11

93.8

92.4

1.4

12

878

878

0

13

876

874

4

14

876

875

1

15

874

873

1

16

865

875

10

17

859

875

10

  注:*序号1217样品数据由西安光华制药厂提供

4 两种试验菌测定四环素效价对比

样品*

序号

短小芽孢杆菌

藤黄微球菌

差值

片剂(%)

1

78.5

76.4

2.1

2

97.1

91.7

5.4

3

86.2

89.1

2.9

4

94.2

95.8

1.6

5

81.3

82.6

1.3

6

85.2

86.1

0.9

原料(u/mg)

7

999

978

21

8

986

978

8

9

986

976

10

10

976

979

3

11

994

989

5

12

988

979

9

13

991

988

3

14

983

979

4

15

985

979

6

16

986

980

6

17

987

981

6

18

976

970

6

粗制品(u/mg)

19

716

704

12

20

682

681

1

  注:*序号819样品数据由西安制药厂提供

5 两种试验菌测定金霉素效价对比

样品

序号

短小芽孢杆菌

藤黄微球菌

差值

原料(u/mg)

1

890.0

896.8

6.0

2

877.1

893.6

16.5

3

881.0

884.0

3

4

871.0

868.2

2.8

5

888.6

873.4

15.2

6

906.7

916.9

10.2

软膏(%)

7

103.8

103.8

0

2.4      杂质含量测定 结果见表6。

6 两种试验菌测定四环素产品杂质含量结果(u/mg)

杂质名称

短小芽孢杆菌

藤黄微球菌

差值

4-差向四环素

394.8

372.0

22.8

脱水差向四环素

5.9

6.0

0.1

脱水四环素

17.6

7.6

10.0

   4 讨论与小结  2显示,两种试验菌测定结果无显著差异,曲线斜率均较稳定,两条直线互相平行。3~表5列出四环素(20)、土霉素(17)及金霉素(7)的考核数据。概率分析表明,两种试验菌测定的效价无显著差异(P0.05)。四环素类抗生素不够稳定,尤其是四环素与金霉素的差向化均较快,产品中差向金霉素含量可高达16%17%。表6显示,两种试验菌对各种杂质的敏感度无明显差异(表中脱水四环素之测定含量两项数据,有待进一步予以验证)。四环类抗生素微生物检定法改用短小芽孢杆菌测定的优点在于:菌液稳定,可保存较长时间,供随时取用,无需临时制备;菌种灵敏;抑菌圈成形快(培养时间短于15 h);抑菌圈清晰,边缘整齐,便于准确测量,故而误差小,复试率低;菌液耐温,可在70℃左右的培养基上摊布菌层。

作者:傅燕芳  张正洁  张玉良  李晓珍

作者单位:西安市药品检验所!西安710054 西安制药厂 西安制药厂 西安市药品检验所!西安710054
  参考文献
  1 BP 1993:150,472,661;A166
  2 USP ⅩⅩⅢ,1995:1510,621(1221)
  3 日本抗生物质医药品基准解说1990:333
  4 中国药典1995年版二部.1995:附录7074
  5 中国药典1977年版二部.1997:附录

 

上一篇:依替米星与妥布霉素治疗急性细菌性感染的疗效比较

下一篇:葡萄糖氯化钠注射液细菌内毒素检查方法的研究

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294