感染性腹泻的诊断标准及处理原则（附录）
录入时间:2010-12-2 15:42:44
来源：国家标准
附录 A（提示的附录）
病原学诊断方法
A1 沙门菌的检验
A1.1 标本的收集
腹泻流行或爆发时，依据患者的数量及分布范围，决定采取标本的份数。所采集的粪便标本应尽快送检。运送时间超过2h者，标本应放入Cary－Blair运送培养基中，在冰浴条件下送检。
A1.2 分离方法
一般取粪便接种一个强选择性培养基（如SS琼脂），一个弱选择性培养基（如麦康凯平板），37℃培养。从培养物挑选可疑菌落作进一步生化鉴定。
A1.3 血清学鉴定
系用O、H、Vi因子血清与待检菌株作玻片凝集试验，先用O因子血清确定其所属O群及其O抗原的各种成分，再用H因子血清检查其第一相和第二相的H抗原以确定血清型，必要时还要用Vi血清检查。
A1.4 菌型的判定和结果报告
综合生化反应和血清学检查结果，查对抗原表，判定菌型并报告结果。
A2 肠致泻性大肠杆菌检验
A2.1 患者粪便标本的收集（同A1.1）
A2.2 分离培养
用接种环蘸取新鲜粪便标本接种于下列培养基：
a）麦康凯琼脂或伊红－美蓝琼脂等对大肠杆菌抑制性较弱的选择性鉴别培养基，大肠杆菌发酵乳糖，在麦康凯琼脂呈桃红色不透明菌落；
b）山梨醇麦康凯琼脂（以1％山梨醇代替乳糖），肠出血性大肠杆菌及某些肠致病性大肠杆菌迟缓发酵山梨醇，菌落为无色；
c）血琼脂平板，用于观察肠致病性大肠杆菌的溶血及与其他菌落的鉴别。
标本接种培养基后，37℃培养18～24h观察结果。
A2.3 初步鉴定
挑取可疑菌落作生化反应及与大肠杆菌多价血清作玻片凝集试验，阳性者作进一步鉴定。
A2.4 鉴定
A2.4.1 肠致病性大肠杆菌（EPEC）
a）标本：婴幼儿水样或蛋花汤样便；
b）生化反应符合大肠杆菌特征；
c）血清学鉴定符合EPEC血清型（表A1）。
表A1 常见肠致泻性大肠杆菌的O血清群及血清型
A2.4.2 肠产毒性大肠杆菌（ETEC）
a）标本：霍乱样水样便；
b）生化反应符合大肠杆菌特征；
c）血清学鉴定符合ETEC血清型（表A1）；
d）检出大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）和／或耐热肠毒素（ST）。测定LT可用兔肠段结扎试验、皮肤试验、ELISA、Biken试验、平板免疫溶血试验、DNA探针杂交和聚合酶链反应（PCR）等方法，各实验室可根据其条件及习惯选用其中之一。
A2.4.3 肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）
a）标本：细菌性痢疾样便；
b）生化反应：不发酵或迟缓发酵乳糖，不产气，除O124外无动力，酒石酸盐阴性，赖氨酸脱羧酶阴性；
c）血清学鉴定符合EIEC血清型（表A1）；
d）豚鼠角膜结膜试验（Sereny试验）或Hela细胞侵入试验阳性。
A2.4.4 肠出血性大肠杆菌（EHEC）
a）标本：早期为水样便，后为血便；
b）生化反应：迟缓发酵山梨醇，在山梨醇麦康凯琼脂平板上菌落呈白色；
c）血清学鉴定：其血清型为O157：H，或O26：K62：H11（表A1）；
d）产生Vero细胞毒（VT）。
A3 致泻性弧菌的检验
A3.1 患者粪便标本的收集（同A1.1，标本在室温条件下运送和保存）。
A3.2 分离培养
A3.2.1 直接分离：采得的标本可直接划种于分离培养基，37℃培养过夜。培养基可选用非选择性或选择性培养基，常用的非选择性培养基有营养琼脂和含5％羊血球琼脂，选择性培养基有弧菌琼脂、庆大霉素琼脂、4号琼脂、TCBS等。
A3.2.2 增菌后分离：收到标本后在直接分离的同时接种碱性蛋白胨水，于37C增菌6～8h后划种选择性培养基或非选择性培养基，37℃培养过夜。
A3.3 初步鉴定
挑选可疑菌落作氧化酶、动力、O／129敏感性检查及O1和O139霍乱弧菌诊断血清玻片凝集试验。符合弧菌性状但在O1和O139霍乱弧菌诊断血清不发生凝集者进一步作系统鉴定。在O1或O139诊断血清发生凝集者可报告检出O1或O139群霍乱弧菌，按相应标准处理。
A3.4 鉴定
对检出的弧菌进一步作系统鉴定，按表A2判定结果。
表A2 致病性弧菌鉴定表
A4 空肠弯曲菌的检验
A4.1 标本的收集（同A1.1）
A4.2 标本的检查
急性期患者的粪便可直接作涂片检查，革兰氏染色或用0.3％碱性复红单染色，镜检为革兰氏阴性、细长、弯曲、呈S形或“海鸥展翅”状、无芽胞。液体标本在暗视野显微镜下可见“射标运动”样的动力。
A4.3 分离培养
本菌为微需氧菌，在含有5％氧气时生长最好，此外，还需要二氧化碳，可以使用：①混合气体法；②烛缸培养法。分离用的培养基有布氏琼脂培养基、Campy－BAP培养基、Skirrow培养基、卵黄盐水培养基、巧克力猪血水琼脂及代血铁盐培养基等。为抑制杂菌生长，提高检出率，可于培养基中加入万古霉素（6mg／L）、两性霉素（2mg／L）、磺胺增效剂（5mg／L）、多粘菌素B（4mg／L）。
A4.3.1 直接分离培养：使用布氏琼脂等进行分离培养，取数接种环粪便划线涂于分离平皿上，在37C或42℃微需氧环境中培养1～3天，如未见生长，应继续培养1～2天，空肠弯曲菌和结肠弯曲菌在42℃条件下培养，胎儿弯曲菌应置37C培养。
A4.3.2 增菌后分离培养：将大约0.1g粪便标本置液体增菌培养基内，于42℃微需氧条件下培养2～3天，然后再用前述的一种培养基分离培养。
A4.3.3 初步鉴定：根据过氧化氢酶的产生，弯曲菌可分两个群，产生过氧化氢酶的有胎儿弯曲菌和空肠／结肠弯曲菌，不产生过氧化氢酶的有唾液弯曲菌。从分离培养基上挑取可疑菌落，结合显微镜形态观察，用相差显微镜观察动力。同时以培养物涂片，革兰氏染色后证实为革兰氏阴性的小杆菌，同时作氧化酶和过氧化氢酶试验均为（＋），对符合弯曲菌属特性的培养物可做进一步鉴别。
A4.4 生化试验
不发酵也不氧化糖类，V－P、甲基红、靛基质、柠檬酸盐、尿素、丙二酸盐、明胶。霍乱红试验均为阴性。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阴性，不分解精氨酸，无脂酶活性，不产生色素。氧化酶、过氧化氢酶阳性。在TTC培养基上菌苔呈紫色有光泽，甘氨酸培养基表面生长似雾状。
A4.5 血清学分型
生化反应确定为空肠弯曲菌以后，可采用被动血凝试验或玻片凝集试验进行血清学分型。
A5 小肠结肠炎耶尔森菌的检验
A5.1 标本的收集（同A1.1）
A5.2 分离方法
可直接接种于SS琼脂或麦康凯培养基等选择性琼脂平皿上，22～30℃培养24～48h。同时取约1g标本接种于10mL pH7.4～7.6PBS，混匀后放0～4℃，培养1日和3周时取增菌培养物按上法分离培养，同时再转种于改良氯化镁孔雀绿增菌液或其他增菌液，22～30℃培养1～2日后分离。
A5.3 挑选可疑菌落
耶尔森菌生长在麦康凯（MAC）培养基上，25℃24h达1～2mm，48h可达3mm，菌落为灰白色或桃红色，不发酵乳糖，部分菌株有一个不整齐的透明边缘，如用解剖镜或显微镜观察菌落，更易于识别。挑选半透明、光滑、不带青色光泽的菌落。耶尔森菌生长在SS培养基上菌落类似MAC培养基上的菌落，但稍小，菌落光滑，无色，大小类似痢疾杆菌菌落。可种三糖铁培养基，经1天、2天、7天各观察一次，取在斜面和底层产酸不产气，H2S阴性者进一步进行鉴定。
A5.4 生化鉴定
耶尔森菌的鉴定主要依靠生化反应，其特征为氧化酶、苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸和精氨酸脱羧酶呈阴性，在22～25℃下多数菌株有动力，少数菌株无动力；在37℃下无动力，甲基红、尿素酶、硝酸盐还原，鸟氨酸脱羧酶和β－半乳糖苷酶呈阳性，能发酵甘露醇、甘露糖、山梨醇和L－树胶醛糖。
A5.5 血清学检查
本菌具有菌体O抗原和鞭毛H抗原。用现在国际常报告的80多个O抗原因子，可将本菌分成不同血清型。目前我国已报告的血清型有54个。
A6 轮状病毒检验
A6.1 粪便标本的收集
收集患者早期腹泻粪便约10g或10mL，置无菌试管内，冰壶冷藏运送至实验室，－20℃保存至检验。
A6.2 标本可采用下列两方法之一检验
A6.2.1 ELISA检测法：国内已有商品试剂盒供应，也可自行配制，试验按常规法进行。
A6.2.2 轮状病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳检测法：按常规方法进行，依据电泳图型判定结果。
A6.2.2.1 轮状病毒：A组轮状病毒是婴幼儿病毒腹泻的主要病原，电泳图可见11条RNA区带，分四组，其排列为4.2.3.2。依据第Ⅳ组10和11RNA片段电泳距离不同，把轮状病毒分为两个亚群：亚群I为短型（S型），两片段距离短；亚群Ⅱ为长型（L型），两片段距离长。
A6.2.2.2 成人腹泻轮状病毒：为B组轮状病毒，主要引起青壮年腹泻。11条RNA电泳图的分布模式为4.2.1.1.1.1.1（或描述为4.2.2.3），第7.8.9节段明显分开，易于与一般轮状病毒区别。
A6.2.2.3 腺病毒电泳图：腺病毒为DNA病毒，在电泳中只见一条粗大的DNA区带，且高于轮状病毒第一条区带，易于与轮状病毒鉴别。
A7 蓝氏贾第鞭毛虫的检验
A7.1 标本的收集
A7.1.1 患者粪便标本的收集：同A1.1。
A7.1.2 采取十二指肠抽出液，用作胆道感染的诊断，也可提高肠道感染的检出率。
A7.1·3 采取患者血液，分离出血清，检查其中的特异性抗体，可提高肠道感染的检出率。
A7.2 实验诊断
A7.2.1 病原学检查：贾第虫在发育过程中有滋养体和包囊2期。
A7.2.1.1 滋养体的检查：滋养体在腹泻病人的粪便和十二指肠液中，可用生理盐水直接涂片，用光学显微镜检查。形态从正面观呈倒置纵切梨性，前端钝圆，后端尖细，大小为（12～15）μm×（6～8）μm，厚2～4μm。侧面观呈瓢状，背面隆起，腹部内陷形成吸盘。在新鲜标本，虫体靠鞭毛摆动很活泼。
A7.2.1.2 包囊的检查：包囊出现在成形粪便或十二指肠液中，可用碘液染色法、乙醚蚁醛沉淀法和硫酸锌离心浮聚法检查。包囊的形成呈间歇性，宜隔天检查，连续3天。包囊呈椭圆形，大小为（8～12）μm×（7～10）μm。囊壁与虫体之间有明显的不均匀空隙，成熟包囊内有4个核。
A7.2.2 血清学检查：患者血清中有对蓝氏贾第鞭毛虫的特异性抗体，可用血清学试验作诊断。血清学检查可使用间接血凝试验，间接荧光抗体试验或ELISA等方法。
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