【摘要】  目的：考察不同配方培养基对小刺猴头子实体多糖含量的影响。方法：选择木屑、玉米芯以及麦麸皮为主要原料组成3种不同配方。结果：以78%玉米芯为主的配方，小刺猴头子实体多糖含量较高，不同配方之间多糖含量比较有显著差异。结论：该结果为进一步的制剂开发提供了很好的理论依据。

【关键词】  小刺猴头 培养基 多糖 含量

　　小刺猴头菌Hericium caput-medusae(Bull.expr)pers.系多孔菌目猴头菌科真菌，具有与猴头菌相类似的药理作用及临床功效［1-4］。目前已有以小刺猴头发酵浸膏为原料治疗慢性胃炎的制剂应用于临床［5］。我们在以前研究的基础上，对小刺猴头子实体多糖在化学结构，药理作用等方面进行了系统的研究。结果表明：小刺猴头子实体多糖可明显抑制胃窦及胃体粘膜的萎缩变薄，增加胃蛋白酶消化活性，降低血清胃泌素含量。而对于小刺猴头菌不同配方培养基对多糖含量的影响则未见报道。为使小刺猴头子实体的栽培工作规范化以及质量可控，我们对此进行了研究分析，现报道如下：

　　1  材料与方法

　　1.1  供试菌种  小刺猴头79001菌株由本所药用真菌研究室提供，母种采用PDA培养基，原种用棉籽壳培养基，1200紫外分光光度计，试剂均为分析纯。

　　1.2  培养基配方  试验设3个培养基配方，各配方原料组成见表1,每个配方3次平行试验，含量测定结果用均值±标准差表示，采用组间t检验判断差异的显著性，统计软件SPSS11.0。

　　表1  不同培养基配方原料组成（略）

　　1.3  栽培方法  选新鲜、无霉、无虫的培养基原料，按配方称重，清水浸泡24h，沥水后加辅料充分拌匀，使含水量为65%-70%，聚丙烯袋装料，126℃灭菌1.5h，无菌操作接种，20-24℃下发菌，定期观察菌丝生长及污染情况，当菌丝体生长到袋料的1/2-2/3时，移入14-24℃的出菇间，常规管理出菇，子实体成熟后及时采收。

　　1.4  多糖含量测定  3.5二硝基水杨酸比色法［6］

　　1.4.1  对照品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每ml含1mg的溶液。

　　1.4.2  标准曲线的制备  精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6ml，分别置于25ml量瓶中，加水补至2.0ml，分别精密加入3.5—二硝基水杨酸试液1.5ml混匀，以2ml蒸馏水和1.5ml 3.5-二硝基水杨酸混合试剂为空白，沸水浴5min,冷却至室温，再分别加入21.5ml蒸馏水，摇匀。于520nm波长处比色，经线性回归得回归方程：A=1.0200C-0.0740 (r=0.9999，n=3)。结果显示含量在0.2mg-1.6mg范围内线性关系良好。

　　1.4.3  供试品溶液的制备［7］  取1、2、3号配方小刺猴头子实体干燥粉末各10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，加热回流提取1h，离心，如此重复提取1次，离心液合并，浓缩后移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取4ml，加乙醇20ml，搅拌，离心，沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，稀释至刻度。

　1.4.4  精密度试验  取对照品溶液，重复测定5次，RSD为0.15%。

　　1.4.5  稳定性试验  取供试品溶液，间隔一定时间，在8h内测定5次，RSD为1.46%,表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

　　1.4.6  重现性试验  取同一批号小刺猴头子实体5份，分别制备供试品溶液，测定吸光度，RSD为1.35%，表明样品重现性良好。

　　1.4.7  加样回收率试验  取已知含量的样品供试液3份，每份精密加入一定量的葡萄糖对照品，依法测定，结果见表2。

　　表2  加样回收率测定（略）

　　1.5  测定方法

　　1.5.1  总糖的测定  精密吸取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加6N盐酸8ml，置沸水浴中加热30min，冷却至室温，加一滴酚酞指示剂，用20%氢氧化钠中和至微红色，加蒸馏水至刻度，摇匀、过滤。精密吸取1ml按标准曲线项下方法测定，根据测得的吸光度值，按回归方程计算含量。

　　1.5.2  还原糖的测定  精密量取供试品溶液5ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。精密量取1ml按标准曲线项下方法测定，根据回归方程计算含量。多糖含量(%)按总糖含量(%)减去还原糖含量(%)计算。

　　2  结果与分析

　　2.1  多糖测定结果  不同配方培养基得到的小刺猴头子实体多糖测定结果，见表3。

　　表3  不同配方培养基多糖测定结果（略）

　　注：与1号配方比较**P＜0.01；与3号配方比较△P＜0.05，△△P＜0.01。
    　　
　　以上结果表明，2号配方无论是从粗多糖重、多糖的百分含量以及多糖重方面与1号和3号相比均差异显著，因此选择2号配方为小刺猴头子实体栽培的基础配方。此结论尚需在进一步的规模化生产中通过大样本来加以验证，以便为有关制剂的进一步开发打下良好基础。

　　3  讨论
    　　
　　以玉米芯为主料的培养基，小刺猴头菌发菌快，菌丝洁白、粗壮、浓密，生长迅速，子实体形状优良，生物转化率高，更重要的是其有效成分多糖含量高。　　

　　玉米芯富含纤维素，为小刺猴头菌提供了充足的碳源，且其持水性强，通气性好，有利于菌丝生长，尤其是玉米芯质地较为疏松，更利于菌丝体分解、转化和吸收。　　

　　玉米芯来源丰富，价格低廉，且此法可消耗大量农副产品，一举多得。

【参考文献】
  　　［1］李 悦,陈 岩.复方猴头冲剂治疗慢性胃炎114例疗效分析［J］.山东医药,1994,34(9):62.

　　［2］杨振领.自拟益中清热活血汤加猴头菌片治疗萎缩性胃炎54例［J］.南京中医药大学学报,1996,12(3):51.

　　［3］夏尔宁,樊邦耘,陈琼华.猴头多糖的提取分离,理化分析及生物活性的初步研究［J］.南京药学院学报,1986,17(2):129.

　　［4］唐选训.联用黄连素、维酶素、猴菇菌治疗慢性萎缩性胃炎37例疗效观察［J］.广西医学,1995,17(4):355.

　　［5］舒建国.胃乐新冲剂治疗慢性胃炎200例疗效观察［J］.安徽医科大学学报,1989,(4).

　　［6］张惟杰.糖复合物生化研究技术［M］.2版.杭州:浙江大学出版社,1999:10.

　　［7］国家药典委员会编.中华人民共和国药典［M］.北京:化学工业出版社,2005:57.

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