• 银河澳门官网入口,银河集团网址登录

  • 银河澳门官网入口,银河集团网址登录

    中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
    微生物技术资料
    文章检索
      首页 > 微生物知识->微生物基本知识->公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定

    公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定



    录入时间:2010-11-25 10:12:26 来源:百度

     

    中华人民共和国国家标准

    公共场所茶具微生物检验方法大 肠 菌 群 测 定GB/T 18204.3-2000

    Methods of microbiological examination for tea set in public places

    - D et er m in at ion o f C ol ifo rm bacteria


    1范围

    本标准规定了公共场所茶具大肠菌群的测定方法。

    本标准适用于公共场所内公用茶具大肠菌群的测定。


    2定义

    本标准采用下列定义。

    大肠菌群coliform bacteria

    指一群在37`C,24 h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

    该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价被检物的卫生质量。


    3仪器

    3.1高压蒸汽灭菌器。

    3.2干热灭菌箱。

    3.3培养箱:36℃士I'C。

    3.4水箱。

    3.5电炉。

    3.6天平。

    3.7灭菌平皿:直径9 Cm,

    3.8灭菌刻度吸管:1 ML,10 ML,

    3.9灭菌棉拭子。

    3.10灭菌剪刀。

    3.11 PH计或精密PH试纸。


    4培养基和试荆

    4. 1乳搪胆盐发酵培养液

    4.1.1成分:蛋白胨20 g

    猪 胆 盐(或牛 、 羊 胆 盐)5g

    乳 糖10g

    0.04 %嗅 甲 酚 紫 水 溶 液25 mL

    蒸 馏 水 1 000 mL

    4.1.2制法:将蛋白脉、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中,调pH至7.4,加澳甲酚紫溶液,混匀,分装到带有倒管的试管中,每管10 mL。以115 `C高压灭菌15 min。

    注:双 料 乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

    4.2伊红美蓝琼脂

    4.2.1成分:蛋白胨10g

    乳 搪10 g

    磷 酸 氢 二 钾2 g

    琼脂17g

    2%伊 红 水 溶 液20mL

    0. 65 %美 蓝 溶 液 10 mL

    蒸 馏 水1 0 00mL

    4.2.2制法:将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,调pH至7.1,分装到烧瓶内。121`C高压灭菌15 min备用,临用时加人乳糖并加热溶化琼脂,冷至50-55`C,加人伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

    4.3乳糖发酵管

    4.3. 1成分;蛋白胨  20 g

    乳糖 10g

    0. 04 %澳 甲 酚 紫 水 溶 液25 mL

    燕 馏 水1 0 00mL

    4.3.2制法:将蛋白陈及乳糖溶于水中,调pH至7.4,加人指示剂,分装到带有倒管试管中,每管3 mL,115 C高压灭菌15 min,

    4.4革兰氏染色液

    4.4.1结晶紫染色液:

    结 晶 紫1g

    95 %乙 醇 20 mL

    1%草 酸 钱 水 溶 液 80 mL

    将 结 晶 紫溶于乙醇中,然后与草酸钱溶液混合。

    4.4.2革兰氏碘液:

    碘 1g

    碘 化 钾 2g

    蒸 馏 水 300m1

    将 碘 与 碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL,

    4.4.3脱色液:

    95 %乙 醇

    4.4.4沙黄复染液:

    沙 黄  0.25g

    95 %乙 醇  10 mL

    蒸 馏 水 90 mL

    将 沙 黄 溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。

    4.5染色法

    4.5.1将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染色1 min,水洗。

    4.5.2滴加革兰氏碘液,作用1 min,水洗。

    4.5.3滴加95%乙醇脱色,约30 s,水洗。

    4. 5.4滴加复染液,复染1 min,水洗,待干,镜检。

    4.6染色结果

    革 兰 氏 阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。

    4.7大肠菌群快速检验纸片

    4.7.1质量要求:纸片必须符合食(饮)具用大肠菌群快速检验纸片质量标准。

    4.7.2质量标准:每张纸片5 cmX5 cm,pH值7. 0-7.4,包装无菌,生产厂家经卫生部门审核认可。


    5检验程序

    大肠菌群检验程序如下:

     

    6操作步骤

    6.1采样方法

    6.1.1随机法:随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具

    6.1.2涂抹法:使用测定细菌总数时采集的样品,无需重采。

    6.1.3纸片法:用灭菌生理盐水湿润5 cmX5 cm大肠菌群快速测定纸片两张,分别粘贴在茶具内、外缘口唇接触处,约30 s后取下,置于无菌塑料袋内。

    6.2检验方法

    6.2.1发酵法

    6.2.1.1用测定细菌总数剩余的检样,倒人双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36℃±1'C培养箱内培养24 h,

    6.2.1.2观察是否产酸、产气,若有变黄和气体产生,该管推测性检验阳性。

    6.2.1.3如不产酸、不产气则为大肠菌群阴性。

    6.2.1.4自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,转种伊红美蓝琼脂平板上,置36℃±1'C培养箱培养18-24 h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实性试验。

    6.2.1.5在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行染色镜检;同时接种乳糖发酵管,置36℃±1'C培养24 h。

    6.2.2纸片法

    将 已 采 样的纸片置36℃士1'C培养箱内培养16^-18h,观察结果。 

    7结果报告

    7.1发酵法

    凡 乳 糖 发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告检出大肠菌群。

    7.2纸片法

    纸 片 保 持紫蓝色不变,则报告为大肠菌群阴性;纸片变黄,并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕,则报告检出大肠菌群。

     

    上一篇:酵母菌对氟康唑的敏感性及三种药敏试验方法的比较

    下一篇:紫丹活血片微生物检查方法学验证

    首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
    业务联系电话
       400-0532-596 0532-66087773
       0532-66087762 0532-81935169
    邮箱:qdhbywg@vip.126.com
    地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
    产品技术咨询
      工作日(周一至周六8:00-18:00):
      18562658263 13176865511
      其它时段:13105190021
    投诉与建议:13105190021 13006536294