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包装饮用水中粪便性链球菌之检验



录入时间:2010-11-19 9:49:23 来源:百度

     本检验方法适用于包装饮用水(包括已包装矿泉水)中粪便性链球菌(Fecal Streptococci)之检验。

器具及材料:

1、干热灭菌器:玻璃用具等之灭菌用,其内部中心温度能达170℃以上,并维持

     该温度1小时以上者。


2
、高压灭菌釜:培养基及稀释液等不能干热灭菌之材料及用具等之灭菌用,

     常以121℃( 15 1b/in2,1kg/cm2或一大气压)灭菌15分钟以上。


3
、培养皿:内径50mm85mm,深度约为12mm14mm,内外面应平坦,

      无气泡,刮伤或其它缺点                            

4、吸管:通常使用者为10ml1ml,应有0.1 ml之刻度。 

5、培养箱:能维持内部温差在±1℃以内者。

6、水浴:能维持水温温差在±1.℃以内者。


7
、薄膜过滤装置:可放置薄膜过滤之漏斗及真空固定支架基座,漏斗应具无菌性

       或可灭菌性。


8
、滤膜孔径0.45um化纤维过滤薄膜(水质检验用有格子,已灭菌)或同极品,

       适用于薄膜过滤装置者。
 

培养基:

 1.KF链球菌洋菜培养基(KF Streptococcus agar              

蛋白(Proteose peptone 10g
酵母抽出物(Yeast extract 10g
氯化钠(NaCl 5g
三偶氮钠(Sodium azide NaN3 0.4g
甘油磷酸钠(Sodiumglycerophosphate 10g
麦芽糖(Maltose 20g
乳糖(Lactose 1g
臭甲酚紫(Bromcresol purple 0.015g
洋菜(agar 20g
蒸馏水 1000ml 

秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水或去离子水中,

             加热溶解洋菜,待完全溶解后,继续加热5分钟,冷却至50℃

             60℃,加1ml1%氯化三酚基双偶氮(2,3,5-triphenylterazoliumchloride

             最后pH值为7.20.2,分装于培养皿中。

 
2.
牛胆汁七叶灵洋菜培养基(Bile esculin agar          

牛肉抽出物(Beef extract 3g
蛋白(Peptone 5g
七叶灵(Esculin 1g
牛胆汁(Oxgall 40g
柠檬酸铁(Ferric citrate 0.5g
洋菜(agar 15g
蒸馏水 1000ml            

       秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水中或去离子水中,

       加热至沸腾并使完全溶解后,于121℃15分钟,最后pH值为6.60.2,

             分装于培养皿中。

3.脑心浸出液(Brain-heart infusion,BHI 

牛脑浸出物(Calf brain infusion 200g
牛心浸出物(Beef heart infusion 250g
蛋白(Protepose Peptone 10g
葡萄糖(Dextrose 2g
氯化钠(NaCl 5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4 2.5g
蒸馏水 1000ml            

 秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水或去离子水中,加热使完全溶解后,分装于试管中,于121℃15分钟,最后值为7.40.2。


试剂

1.30%过氧化氢试剂

2.革兰氏染色液(Gram,s stain solution:

革兰氏染色液组包括哈克氏结晶紫液(Hucker,s crystal violet),革兰氏碘液,革兰氏脱色剂及革兰氏复染液(Safranin

取样:用以灭菌之容器或无菌袋盛取水样品,取检体量为100ml,若污染情形严重时,则可采10ml每一检体至少做二重复。

过滤:以减压过滤方式,将检体过滤之孔径为0.45 um 滤膜上。

培养:经第2.4节过滤后之薄膜,取出放置在置有KF链球菌洋菜培养基之培养皿上,倒置,放入培养箱,在35℃培养48小时。

计数:经培养后,观察有否菌落生成,若有按红或粉红之菌落,是为典型菌落,挑选35个典型菌落进行确认试验,照确认试验所得之结果一确定之比例计算出粪便性链球菌之估计值,以CFU/100ml表示。

 

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