器具及材料:
1、干热灭菌器:玻璃用具等之灭菌用,其内部中心温度能达
该温度1小时以上者。
2、高压灭菌釜:培养基及稀释液等不能干热灭菌之材料及用具等之灭菌用,
常以
3、培养皿:内径
无气泡,刮伤或其它缺点
4、吸管:通常使用者为10ml及1ml,应有0.1 ml之刻度。
5、培养箱:能维持内部温差在±
6、水浴:能维持水温温差在±1.℃以内者。
7、薄膜过滤装置:可放置薄膜过滤之漏斗及真空固定支架基座,漏斗应具无菌性
或可灭菌性。
8、滤膜孔径0.45um化纤维过滤薄膜(水质检验用有格子,已灭菌)或同极品,
适用于薄膜过滤装置者。
培养基:
1.KF链球菌洋菜培养基(KF Streptococcus agar)
蛋白(Proteose peptone)
酵母抽出物(Yeast extract)
氯化钠(NaCl)
三偶氮钠(Sodium azide NaN3)
甘油磷酸钠(Sodiumglycerophosphate)
麦芽糖(Maltose)
乳糖(Lactose)
臭甲酚紫(Bromcresol purple)
洋菜(agar)
蒸馏水 1000ml
秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水或去离子水中,
加热溶解洋菜,待完全溶解后,继续加热5分钟,冷却至
最后pH值为7.2士0.2,分装于培养皿中。
2. 牛胆汁七叶灵洋菜培养基(Bile esculin agar)
牛肉抽出物(Beef extract)
蛋白(Peptone)
七叶灵(Esculin)
牛胆汁(Oxgall)
柠檬酸铁(Ferric citrate)
洋菜(agar)
蒸馏水 1000ml
秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水中或去离子水中,
加热至沸腾并使完全溶解后,于
分装于培养皿中。
3.脑心浸出液(Brain-heart infusion,BHI)
牛脑浸出物(Calf brain infusion)
牛心浸出物(Beef heart infusion)
蛋白(Protepose Peptone)
葡萄糖(Dextrose)
氯化钠(NaCl)
磷酸氢二钠(Na2HPO4)
蒸馏水 1000ml
秤取各成分(或适量之商业制品)溶于蒸馏水或去离子水中,加热使完全溶解后,分装于试管中,于
试剂
1.30%过氧化氢试剂
2.革兰氏染色液(Gram,s stain solution):
革兰氏染色液组包括哈克氏结晶紫液(Hucker,s crystal violet),革兰氏碘液,革兰氏脱色剂及革兰氏复染液(Safranin)
取样:用以灭菌之容器或无菌袋盛取水样品,取检体量为100ml,若污染情形严重时,则可采10ml每一检体至少做二重复。
过滤:以减压过滤方式,将检体过滤之孔径为0.45 um 滤膜上。
培养:经第2.4节过滤后之薄膜,取出放置在置有KF链球菌洋菜培养基之培养皿上,倒置,放入培养箱,在
计数:经培养后,观察有否菌落生成,若有按红或粉红之菌落,是为典型菌落,挑选3至5个典型菌落进行确认试验,照确认试验所得之结果一确定之比例计算出粪便性链球菌之估计值,以CFU/100ml表示。