银河澳门官网入口,银河集团网址登录

银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->微生物基本知识->比浊法自动测定乙酰螺旋霉素片的效价

比浊法自动测定乙酰螺旋霉素片的效价



录入时间:2010-11-18 10:27:39 来源:中国论文下载中心

      【摘要】目的建立比浊法测定乙酰螺旋霉素片的方法。方法金葡菌为实验菌,加菌量约0.5%,培养3.54.5h测定。结果抗生素线性浓度为3.215.6μg/ml,平均回收率为100.7%,RSD=1.4%。结论本方法操作方便、快速,灵敏、可信限率低,结果准确,精密度好,可作为乙酰螺旋霉素片效价的测定方法。

【关键词】 效价;比浊法;乙酰螺旋霉素

Content determination of acetylspiramycin tablets

by turbidimetric method

Liu Ying and Cui Chunying

 

ABSTRACT Objective To establish a turbidimetric method for the content determination of acetylspiramycin tablets. Method The test organism was Staphylococcus aureus. Adjust the bacterial suspension of Staphylococcus aureus inoculation with about 0.5%ratio, at ℃ for 3.54.5 hours. Results The linear range was 3.2 g/ml15.6 g/ml and the average recovery was 100.7% ; RSD=1.4%. Conclusion The method was sensitive, rapid, precise and feasible for the determination of Acetylspiramycin tablets.

KEY WORDS Potency; Turbidimetric method; Acetylspiramycin tablets

乙酰螺旋霉素是螺旋霉素乙酰化衍生物,属半合成大环内酯抗生素,是单乙酰螺旋霉素II、单乙酰螺旋霉素III与双乙酰螺旋霉素II、双乙酰螺旋霉素III四个组分为主的混合物,毒性低,不良反应小,较广泛有效地应用于金葡菌、链球菌、肺炎杆菌、大肠埃希菌、淋球菌等引起的感染[1]。

因乙酰螺旋霉素为多组分抗生素,一般的化学分析方法或高效液相色谱法均无法测定其含量,虽有文献[2,3]报道可用紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素制剂的含量,但紫外分光光度法专属性差,测定结果误差较大。对乙酰螺旋霉素及其制剂的含量测定,中国药典2005年版[4]采用管碟法测定其效价,但管碟法操作繁杂、耗费时间慢长,影响因素多,且需有经验的实验人员才能得到理想的结果,同时由于乙酰螺旋霉素是多组分,容易导致双圈现象,使重现性差。比浊法是一种快速、方便、经济的测定抗生素含量的方法,中国药典2005年版微生物检定法新增浊度法测定庆大霉素效价[5]。国内正在研制微生物比浊法测定仪,我们应用该测定仪在线自动测定乙酰螺旋霉素效价,减少了多种实验影响因素,节省了大量人力劳动,4h即可得到实验结果。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

TU1901紫外分光光度计,北京普析通用公司;CZB1抗生素光度测量仪,北京潮声公司;WBS100微生物比浊法测定仪与ZY300多功能微生物自动测量分析仪均是北京先驱威锋技术开发公司生产;BP211D天平,Mettler公司。1.2 菌株、样品、培养基与试剂

金葡菌CMCC26003、大肠埃希菌 CMCC44103与肺炎克雷伯菌CMCC46117均由中国药品生物制品检定所提供。

乙酰螺旋霉素标准品由中国药品生物制品检定所提供。乙酰螺旋霉素片为河南天方药业股份有限公司生产;乙酰螺旋霉素片为石药集团药业有限责任公司生产。

营养琼脂培养基与抗生素检定培养基III均为北京奥博星生物技术有限责任公司生产;0.9%氯化钠溶液和磷酸盐缓冲溶液均按中国药典2005年版二部附录[5]配制。

2 效价测定

2.1 管碟法

按中国药典2005年版二部方法[4]测定。

2.2 比浊法

含菌培养基的配制 取金葡菌新鲜斜面培养物,接种于营养琼脂培养基小斜面上,置3537℃培养1820h,用0.9%氯化钠溶液洗下菌苔,并用0.9%氯化钠溶液稀释,使其在650nm波长处的吸光度约为1.0。取菌液约5ml加至培养基100ml中,摇匀,为含菌培养基。

溶液的配制

标准品溶液 精密称取乙酰螺旋霉素标准品适量,加乙醇溶解后,加灭菌水稀释至1000g/ml的溶液,作为贮备溶液;临用前再用磷酸盐缓冲溶液稀释至实验浓度。

供试品溶液 精密称取研细后的乙酰螺旋霉素片适量,加乙醇溶解后,加灭菌水稀释至1000g/ml的溶液,作为贮备溶液;其余稀释步骤同标准品溶液。

培养与测定 分别精密吸取实验用标准品溶液和供试品溶液各1.0ml,加入灭菌培养管中,再加入含菌培养基9.0ml,置抗生素比浊法测量仪内,于培养。另取稀释溶剂1.0ml,空白培养基9.0ml,混匀,作为空白对照;再取稀释溶剂1.0ml,含菌培养基9.0ml,混匀,作为阳性对照。仪器在线于530nm波长处测定各管金葡菌对数生长期内不同培养时间下的吸光度或浊度。根据量反应平行线原理[6]计算供试品的效价值。

3 结果

3.1 测定条件的选择

实验菌的选择由于乙酰螺旋霉素适用于革兰阳性菌如金葡菌、链球菌、肺炎杆菌、大肠埃希菌等,根据其抗菌作用与中国药典2005年版常用的效价测定用菌株,初步选择大肠埃希菌、金葡菌与肺炎克雷伯菌为实验用菌株,进行进一步的筛选。

绘制菌株在不同抗生素浓度的生长曲线,根据生长曲线及在不同抗生素浓度下菌液吸光度值的变化,发现大肠埃希菌对乙酰螺旋霉素不敏感,对不同浓度的乙酰螺旋霉素,培养后菌液吸光度值相差很小,菌株生长曲线无明显地对数生长期,不适用。乙酰螺旋霉素对肺炎克雷伯菌抑制作用较强,对不同浓度的乙酰螺旋霉素,培养后菌液吸光度值差值较小,且菌生长缓慢,也不适用。金葡菌对乙酰螺旋霉素敏感,对不同浓度的乙酰螺旋霉素,培养后菌液吸光度值差值较合适,菌株生长曲线有较好地对数生长期,可以选择。

1 金葡菌的生长曲线

实验菌浓度的选择 按含菌培养基的配制方法,加入不同体积的菌液2.08.0ml至培养基100ml中,结果显示菌液浓度太低时,细菌生长受抗生素抑制,生长时间达4h,吸光度值仍达不到0.2;菌液浓度太高时,吸光度值很快超过0.7,且由于培养基中含菌量太多,菌本身互相抑制,导致菌生长杂乱,偏离平行较差;最终选择菌液浓度为0.5%左右,此时菌生长良好,有明显地对数生长期,吸光度一般为0.30.7,偏离平行良好。

3.2 线性与范围

精密吸取实验用贮备溶液适量,分别用磷酸盐缓冲溶液稀释至下列浓度:1.231.5g/ml,分别量取上述溶液各1.0ml,加入灭菌培养管中,每个浓度35管,再加入含菌培养基9.0ml,置抗生素比浊法测量仪内,于培养。仪器在线于530nm波长处每隔5min自动测定各管肺炎克雷伯菌对数生长期内不同培养时间下的吸光度或浊度,以吸光度或浊度对浓度的对数进行回归计算,结果为乙酰螺旋霉素在1.283.12g/ml浓度范围内,高、低剂量间的浊度无明显差别;在12.831.125g/ml浓度范围内,吸光度或浊度与浓度的对数虽然也成线性关系,但在阳性菌生长为合适的浊度时,样品溶液中的菌被较强地抑制,生长缓慢,此范围不适合比浊测定用;在3.215.6g/ml浓度范围内吸光度或浊度与浓度的对数线性关系良好,阳性菌与样品溶液中的菌均生长良好,尤以6.415.6g/ml浓度范围为最佳,此时不但阳性菌与样品溶液中的菌均生长良好,各剂距间吸光度或浊度的差距较大,标准曲线的斜率大,所得结果中可信限率最好,线性方程为:

A=-0.9514ogC+1.4662 r=0.9995

3.3 测定方法

标准曲线法 标准品溶液的浓度分别为6.4、8.0、10.0、12.515.625g/ml,供试品溶液的浓度为10.0g/ml。

二剂量法 标准品溶液与供试品溶液的高低浓度分别为8.010.0g/ml。

照中国药典2005年版二部附录与2.2.3进行培养与测定,根据量反应平行线原理[6]计算供试品的效价值。

3.4 准确度

精密称取乙酰螺旋霉素标准品适量,按乙酰螺旋霉素片处方加入辅料,照供试品溶液的稀释方法稀释至实验浓度,作为供试品溶液。标准品溶液的配制同上,剂量为80%、100%、120%的平均回收率为100.7%,RSD=1.4%,在效价测定范围内,回收率良好。

3.5 精密度

实验用标准品溶液的配制同2.2,同时也用作供试品溶液,按标准曲线法重复测定6次,测定值分别为98.64%、101.33%、99.51%、102.29%、101.14%102.50%,RSD=1.5%,在效价测定范围内,该方法精密度良好。

3.6 测定样品

用两个厂家不同测定原理的仪器对3批乙酰螺旋霉素片进行测定并与管碟法结果进行比较,结果无显著性差异。

4 讨论

比浊法较管碟法有明显优点,操作方便、快速,可信限率低,尤其是仪器在线自动测量,使结果更准确,精密度更好,值得推广应用,对医院和企业检测半成品能缩短检测时间,提高工作效率。

文献[6,7]报道,在比浊法实验中,pH7.0是培养 表1 乙酰螺旋霉素片的比浊法与管碟法效价测定WBS100微生物比浊法测定仪采用的是新型半导体检测器,CZB1抗生素光度测量仪采用的是光电倍增管,两者采集透过光的原理有差别,但测定的都是光的透过率,最后换算为吸光度,两者测定原理不同,但由于效价测定是与标准品同时测定,所以都可达到测定抗生素供试品效价的目的。两种仪器均为我国正在研制中的比浊法测定仪器,硬件与软件均正处在完善的过程中,随着时间的推移,硬件与软件都会更加成熟。

【参考文献】
1] 四川抗菌素工业研究所. 抗生素及抗感染药物[M. 上海:上海科学技术出版社,1981:213.2] 齐蓟,李振龙. 紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素含量[J. 黑龙江医药科学,2001,24:50.3] 陈俊芳,王环平,张振军. 紫外分光光度测定乙酰螺旋霉素片的含量[J. 中国药事,2002,16:699.4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版[S. 北京:化学工业出版社,2005:7.5] 杨亚莉,胡昌勤. 中国药典2005年版微生物检定法的增修订情况及要点[J. 中国抗生素杂志,2005,30:721726.6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版[S. 北京:化学工业出版社,2005:附录7984.7 Donald P, Paul A, Walter H, et al. Semiautomated turbidimetric microbiological assay for determination of cefazolin J. Antimicrob Agents Chemother,1974,5:2232278 Joseph P, Ronald P. Turbidimetric bioassay for carbenicillin J. Antimicrob Agents Chemother,1973,3:364368.

 

上一篇:一种评价光合细菌调水作用的实验方法探讨

下一篇:抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294