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细菌的保存方法



录入时间:2010-11-1 9:04:21 来源:生命经纬知识库

1、细菌保存于穿刺培养物中:一般细菌保存于穿刺培养物可以维持两年。具体方法如下:用灭菌接种针挑取分散良好的单菌落,针缓慢穿过琼脂到达瓶底,连续几次,盖上瓶盖拧紧,做好标记。室温下存放于暗处。(最好一点可以将瓶盖放松,在适当温度下培养过夜,再拧紧瓶盖并加封Parafilm膜,室温或最好在4度避光保存)。

2、细菌保存于含有甘油的培养物中:

1)在液体培养基中生长的细菌培养物:取0.85ml细菌培养物,加入0.15ml高压灭菌甘油,振荡培养物使甘油分布均匀,然后转移到标记好的保存管内,密封,在乙醇-干冰或液氮中冻结后再转至-70度长期保存。在复苏时,用灭菌接种针刮取冻结的培养物表面,然后立即把黏附于接种针上的细菌划于含适当抗生素的LB琼脂平板表面,于37度过夜。

2)在琼脂平板上生长的细菌培养物:从琼脂平板表面刮下细菌放入装有2mlLB的无菌试管内,再加入等量的含有30%灭菌甘油的LB培养基,振荡使甘油完全分布均匀后,分装于无菌保存管内,密封,再按前述方法冰冻保存。这一方法的优点在于可用于保存在质粒载体上建立的cDNA文库。

如果甘油与培养基混合后冻存在一般冰箱的冰冻室里,不能反复复苏使用,而且如果甘油含量太低,冻结成冰块,复苏效果不佳。一般都使用甘油终浓度为30%。

 

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