3.YEP培养基:每升含有:牛肉浸膏
4.实生苗培养基: 1/2MS培养基,附加
5.预培养基:MS+1.0~1.2mg/L 2,4-D+0.2mg/L 6-BA+
6.分化培养基:MS+0.2mg/L IAA+2.0mg/L 6-BA+
7.筛选培养基:分化培养基+AgNO3 6mg/L+500mg/L Cb+10mg/L Kan,PH=5.8。
(三)试验仪器
超级超净工作台
智能气候培养箱
大型落地式高速冷冻离心机
凝胶成像系统
台式常温高速离心机
立式灭菌锅
电泳相关设备
(四)农杆菌介导植物转化实验步骤(以油菜子叶转化为例)
1.根癌农杆菌的培养
将保存于甘油中的菌种用划线法接种于LB固体平板培养基上培养,每次转化前一天从平板上挑取单菌落接种于YEB液体培养基中,在
2.建立无菌苗
将油菜种子用75%酒精浸泡30s后,于0.1%HgCl2溶液中处理10min,无菌水冲洗3次后,接种于1/2MS固体培养基上,在25±
3.农杆菌侵染
在无菌条件下,将预培养2d子叶和下胚轴收集于一个无菌小烧杯中,浸入于活化并稀释了5~8倍的农杆菌液中,5min后转到无菌滤纸上,吸干多余的菌液,接至共培养培养基中,在
4.分化培养
将共培养2d的受体材料先用无菌水冲洗2~3次至水澄清后,用500mg/LCef浸泡30~40min,材料取出并置于含有无菌滤纸的培养皿中干燥2d。将培养物转移至附加8~15mg/L卡那霉素和500mg羧苄青霉素(或头孢霉素)的分化培养基中,在
5.筛选培养
将分化培养中获得的绿芽移置筛选培养基(卡那霉素浓度升致25mg/L),每隔15~20d转接一次。
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