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    幽门螺杆菌感染的现行临床诊断检测技术(下)



    录入时间:2010-10-25 8:49:40 来源:螺旋杆菌临床研究进展

    唾液幽门螺杆菌抗原检测技术
      
    目前用唾液检测口腔内幽门螺杆菌的抗原技术,有唾液抗原ELISA检测法(ELISA双抗体夹心法),及我们Ameritek公司研发的唾液幽门螺杆菌抗原检测技术,此技术是我们研究团队在过的10余年里研究和开发的一种新的、快速的诊断检测方法。这种方法在幽门螺杆菌侵入人体后,在病症初期就可以把它检测出来。此新的检测技术的产品称"胃幽门螺杆菌唾液测试板(HPS),我们团队已获得技术专利,及中国和欧洲食品药品监督管理局的注册证书(12,13)。我们公司是一家专业从事体外诊断试剂产品研发、生产和销售的高科技生物公司。我们有设备先进、技术力量雄厚的螺旋杆菌实验室,我们的实验室是世界上少数能大规模培养幽门螺杆菌和收集其鞭毛的实验室,能制备纯化尿素酶(CagA)抗原和抗体,实验室为我们提供了研发和生产幽门螺杆菌快速诊断试剂和杀灭幽门螺杆菌药物的可能性。
    2.1 HPS
    检测法的原理:HPS检测法是采用纯化尿素酶抗体,应用胶体金层析式双抗体夹心法技术
    ,定性检测唾液中幽门螺杆菌释放的尿素酶抗原,从而诊断胃和口腔幽门螺杆菌感染,是一种灵敏度高、能够特异性诊断人体幽门螺杆菌感染的快速试剂。
    2.2  HPS检测法的使用方法:将体温表式的测试卡长端放在舌下吸取唾液,或将唾液吐在收集杯内作为测试标本。将标本滴在测试板收集口之后10分钟左右,在观察窗口出现一条红线为阴性,出现二条红线为阳性。
     2.3  HPS
    检测法与常用幽门螺杆菌检测方法的比较:(1)Ameritek公司的HPS检测法与胃粘膜组织切片W-S银染镜检比较,39例有上消化道症状的初诊成年患者,内镜检查前接受HPS检测,内镜下胃幽门窦部粘膜活检组织W-S银染直接观测幽门螺杆菌。39例中HPS阳性29(74.4%),切片染色镜检阳性25(64.1%),在切片染色镜检阳性25例中HPS阳性21(84%)。(2)Ameritek公司的HPS检测法与C14尿素呼气试验比较,169例消化科门诊初诊成年病人,接受HPS检测后即进行C14尿素呼气试验。169例中HPS阳性124(73.4%), C14尿素呼气试验阳性73(43.2%),C14尿素呼气试验阳性73例中HPS阳性71(97.3%)。(3)Ameritek公司的HPS检测法与血清抗体测定比较,44例有上消化道症状的成年患者,接受HPS检测后采血测定血清中Hp-IgG、IgM抗体。44例中HPS阳性35(79.5%),血清总抗体阳性39(88.6%),在总抗体阳性39例中35HPS阳性(89.7%)。三组有上消化道症状的成年患者,HPS阳性率分别为74.4%、73.4%、79.5%;切片染色镜检、尿素呼气试验、血清总抗体阳性率分别为64.1%、43.2%、88.6%;切片染色镜检、尿素呼气试验、血清总抗体阳性者,HPS阳性率分别为84%、97.3%、89.7%。以上结果显示:采用HPS检测法,口腔幽门螺杆菌检出率高于胃内幽门螺杆菌检出率,胃内幽门螺杆菌检测阳性者,口腔幽门螺杆菌检出率尤高。

    2.4  胃与口腔幽门螺杆菌感染的相关性  自从1989Krajden等首次成功地从胃炎病人牙菌斑中分离培养出幽门螺杆菌以来,关于口腔作为胃外幽门螺杆菌另一聚居地的假设倍受人们关注。近年来,国内外学者有关胃幽门螺杆菌感染与口腔幽门螺杆菌感染相关性的研究报道颇多,主要集中在口腔是幽门螺杆菌常栖居区域之一,还是含有幽门螺杆菌胃液返流口腔所致尚存在争议。常用于检测幽门螺杆菌的"金标准",如牙菌斑或唾液细菌培养和口腔粘膜括片染色镜检,尚难以在口腔中作出与胃内相同且稳定的结果。口腔中菌群的复杂性可能是影响从口腔中分离出幽门螺杆菌的重要因素,另一个影响结果的因素是幽门螺杆菌在口腔中分布不均匀。陈发明等(14)发现龋病部位牙菌斑幽门螺杆菌阳性率明显高于非龋病部位的牙菌斑。尽管幽门螺杆菌是否在口腔中定栖尚未有结论,但胃和口腔幽门螺杆菌感染的相关性已得到多数学者认同。Wang(15)PCR法检测31例胃病患者的胃粘膜组织与其唾液中4种不同幽门螺杆菌基因型,CagA、VacAm1、VacAm2以及VacAS1,结果显示,95%的胃粘膜与其相应唾液至少一种幽门螺杆菌基因型相同,80% 2种基因型一致,59% 3种基因型一致,27% 4种基因型均一致。彭惠等(16)SSCP-PCR法检测到胃粘膜和唾液中幽门螺杆菌的两种VacA基因型的一致性为98%。提示口腔和胃内幽门螺杆菌具有同源性。李明等(17)采用光镜下涂片或切片染色和快速尿素酶试验联合检测的方法,对口腔和胃内幽门螺杆菌同步检测结果显示,口腔中幽门螺杆菌检出率为90.56%(326/360),胃内幽门螺杆菌检出率为70%(252/360%)(P<0.005)。显示口腔与胃内幽门螺杆菌同步检测结果,口腔中幽门螺杆菌检出率明显高于胃内检出率,提示口腔中幽门螺杆菌可能是胃内幽门螺杆菌的重要来源。Miyabayashi(18)研究47例幽门螺杆菌阳性胃病患者,根除治疗后用巢式PCR检测唾液中HpDNA,结果发现,唾液中幽门螺杆菌阳性患者其根治率(12/23,52.1%)明显低于唾液幽门螺杆菌阴性患者(22/24,91.6%)(P<0.05)。随访2,唾液中幽门螺杆菌阳性组胃病缓解率为69.5%,阴性组为95.8%(P<0.05)。侯海玲等(19)观察58例胃粘膜尿素酶试验阳性患者,其中W-S银染阳性56(96.5%),细菌培养阳性49(84.5%)。此58例胃幽门螺杆菌感染者,口腔牙菌斑或漱口液尿素酶试验至少一项阳性25(43.1%)。58例经根除治疗后4周接受胃幽门螺杆菌检测,胃和口腔幽门螺杆菌均阳性的25例中,9例胃中再次检出幽门螺杆菌,其根除率64%(16/25),低于口腔幽门螺杆菌阴性者的根除率72.7%(24/33(P<0.05)。1年后口腔幽门螺杆菌阳性者的胃根除率下降为36%(9/25),显着低于口腔阴性者的63.6%(21/33)(P<0.05)。口腔内幽门螺杆菌的存在,可影响根除治疗的疗效,并且可能是胃病复发的一个重要因素。

    2.5  HPS检测法的临床应用及评价:作者曾在浙江大学医学院附属笫一医院等多个单位做了临床实验,结果如下:(1)126例有上消化道症状的初诊患者,进行HPS检测后,同步接受内镜下胃粘膜快速尿素酶试验、切片W-S银染镜检或14C尿素呼气试验,HPS阳性率为73.02%(92/126),尿素酶试验、银染镜检和呼气试验总阳性率为53.17%(67/126),67例尿素酶试验、银染镜检或呼气试验阳性患者HPS阳性率为70.15%(47/67)。(2)129例内镜下胃粘膜快速尿素酶试验和/或切片W-S银染镜检证实胃幽门螺杆菌感染的患者,接受PPI三联7天疗法,疗程结束后至少4周进行C13C14尿素呼气试验,同步作HPS检测,HPS阳性率为75.97%(98/129),呼气试验总阳性率为34.11%(44/129),44例呼气试验阳性患者HPS阳性率为88.64%(39/44)。(3)33例无上消化道症状的志愿者,检测HPS后同步接受C14尿素呼气试验,HPS阳性率为81.82%(27/33),呼气试验阳性率为21.21%(7/33),7例呼气试验阳性者HPS阳性率为100%(7/7)。(4)35例有消化不良症状的患儿,进行HPS检测后同步接受C13呼气试验27,HPS阳性率为88.57%(31/35),呼气试验阳性率为25.93%(7/27),7例呼气试验阳性者HPS阳性率为100%(7/7)。(5)150HPS阳性的志愿者,随机分成两组,治疗组105,接受我们Ameritek公司研发试生产的多聚赖氨酸复合体配制的漱口液和口腔喷雾剂治疗2个月;对照组45,未给于任何治疗。治疗组于治疗结束后2周进行HPS复查,对照组同时接受检测,治疗组HPS阴转率为81.91%(86/105),对照组无1例转阴。

    结果显示:(1) 4HPS检测阳性率为73.02%~88.57%,与多数报道相似(17,20),支持唾液中存在高幽门螺杆菌检出率现象。(2) 4组中经内镜下胃粘膜快速尿素酶试验、切片W-S银染镜检、C13C14尿素呼气试验阳性,证实有胃幽门螺杆菌感染患者,同步HPS检测阳性率为70.15%~100%。(3) 胃幽门螺杆菌感染合并口腔幽门螺杆菌感染患者,可影响PPI三联7天疗法的疗效,且对口腔幽门螺杆菌感染的治疗几乎无效。(4) 多聚赖氨酸复合体配制的漱口液和口腔喷雾剂,对口腔幽门螺杆菌感染有明显疗效,HPS检测阴转率为81.91%,对照组无1例转阴。

        目前,虽然对口腔是幽门螺杆菌定植地之一,还是胃液返流造成口腔中出现幽门螺杆菌的问题,至今尚存在争论,但是口腔内存在幽门螺杆菌已是不争的事实。多数学者认为幽门螺杆菌仅寄居于人类,人与人之间的传播是唯一的传播途径,-口、胃-口传播是主要的传播方式,-口传播可能是幽门螺杆菌随脱落的胃上皮通过胃、食道返流入口腔,同时口腔中的幽门螺杆菌也可随吞咽入胃。口腔粘膜与胃粘膜同属消化系统,均来自外胚层,其结构、功能、生理、病理有许多相似之处,唾液腺特异性血凝素的存在,是幽门螺杆菌在口腔中寄生的原因。幽门螺杆菌利用其代谢产生的尿素酶分解尿素形成"氨云",造成有利于幽门螺杆菌生存和繁殖的特殊生态学龛(21)。作者认为,口腔幽门螺杆菌感染,不但与牙周病、龋病、口腔复发性溃疡、口腔扁平苔癣、口臭等口腔疾病有关,口腔很有可能确为幽门螺杆菌的胃外定植地,是胃幽门螺杆菌的重要储存库,可源源不断的将幽门螺门杆菌伴随唾液和食物吞咽到胃内,引起胃幽门螺杆菌病的发生和复发。

    2.6 HPS检测法的适应证: HPS检测法采用的标本是唾液,适用于所有人群。体温表式测试卡,将卡放置舌下吸取唾液即可进行检测;测试板只需收集唾液,可由医务人员进行检测;婴幼儿及不能主动配合者,如能用塑料吸管吸取到唾液也可进行测试。HPS检测法、ELISA检测法都是从唾液中检测幽门螺杆菌抗原,ELISA检测法需在有一定设备的实检室进行。HPS检测法主要用于检查口腔幽门螺杆菌感染和胃幽门螺杆菌感染,可作为口腔疾病的一种常规检查,也可作为消化科胃病和消化不良病因的筛选,亦可用于口腔和胃、特别是口腔幽门螺杆菌感染治疗后的疗效判定。

    现在我把目前存在的主要检测方法归纳为三大类别,并作一具体比较, 见表5-1

    5-1: 胃幽门螺旋杆菌临床主要检验方法对比表

     

    胃镜法

    C14同位素呼气法(22)

    HPS 唾液法(23,24,25,26)

    原理

    检出病理灶及进行标本生化或化学法测出螺旋杆菌

    间接检出螺旋杆菌抗原

    间接检出螺旋杆菌抗原

    检验标本

    病理切片

    呼出气体

    唾液

    精确度

    病理切片精确度高,化学反应法精确度低,小病灶容易漏检

    精确度高(判断患者是否有胃幽门螺旋菌感染)

    精确度高, 同时判断患者口腔和胃幽门螺旋菌感染

    特异性

    , 对诊断毒性螺旋杆菌具有盲区

    检验所需时间

    数小时,病理报告数天

    自服用同位素到呼出气体需1小时

    5-10分钟

    检验方法繁复

    繁复

    繁复

    简单

    基础设备费用

    昂贵

    昂贵

    不需要

    试剂费用

    中等

    昂贵

    检验风险

    中等

    不安全

    安全

    病人接受程度

    有害怕心理

    病人害怕同位素

    容易接受

    对环境影响

    有严重的环境污染,同位素在人体内半衰期为7320年,全衰期为6万年。

    适宜人群

    不适宜孕妇儿童

    不适宜孕妇、哺乳妇妇女和儿童

    适用所有年龄段人群

    检验方法专利情况

    专利已过期

    美国专利

    美国,中国专利

    参考文献

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