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淀粉酶的固定化生产



录入时间:2010-10-19 10:03:34 来源:互联网

 

一、实验目的:

学习细胞固定化的原理,通过海藻酸钠包埋固定产淀粉酶的枯草芽孢杆菌,掌握菌体包埋固定的基本方法,了解固定化细胞在实际中的应用。

二、 实验原理:

细胞固定化克服了传统游离细胞发酵的不足,本实验以海藻酸钠为载体,以CaCl2为交联剂,进行固定化枯草芽孢杆菌。海藻酸钠是从海藻提取获取的藻酸盐,为D-甘露糖醛酸和古洛糖醛酸的线性共聚物,多价阳离子(如Ca2+)可诱导凝胶。

三、 实验材料:

1.菌株:枯草芽孢杆菌。

2.发酵培养基:葡萄糖:4%;蛋白胨:1%;磷酸二氢钾:0.5%;七水硫酸镁:0.2%酵母膏:0.5%,pH:5.5-6.5。

3.固定化用培养基:淀粉:2%;葡萄糖:0.5%;蛋白胨:1%;磷酸二氢钾:0.5%;七水硫酸镁:0.2%;酵母膏:0.5%,pH:5.5-6.5。

四、实验步骤:

1)培养基灭菌:取250mL三角瓶,分别放入配好的液体培养基100ml,灭菌冷却。

2)种子活化和接种:将枯草芽孢杆菌接入培养基,30培养活化,取活化后的枯草芽孢杆菌分别接入已灭菌冷却的三角瓶培养瓶,振荡混匀。

3)培养:将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱,200r/min,25培养三天,离心收获菌体并用无菌水洗涤一次,制备菌悬液,使其中枯草芽孢杆菌菌数为2.3×107/ml。

4)海藻酸钠及交联剂的制备:

海藻酸钠溶液的制备:取海藻酸钠1.5g,2.0g,2.5g,3.0g,3.5g,分别置于250ml三角瓶中,各加入100ml蒸馏水,放置并搅拌,灭菌。

交联剂的制备:配制2%浓度的CaCl2,灭菌。

5)固定化枯草芽孢杆菌的制备

将枯草芽孢杆菌细胞菌悬液与海藻酸钠溶液按照11 充分混匀后,用一注射器,将混合液滴入交联剂中, 交联剂的阳离子从外部扩散进入海藻酸钠枯草芽孢杆菌混合液珠内, 将细胞包埋其中。制成凝胶小球,使酵母固定化,用无菌水洗涤固定化细胞,然后加入2% CaCl2,平衡24 h即可使用。

6)固定化细胞的增殖:将固定化细胞转入固定化增殖培养基25,pH6下培养。

5 实验结果

   利用DNS法检测培养液中葡萄糖浓度,以确定是否产生了淀粉酶,经过一段时间培养,滴入碘液,看是否有蓝色产生。

六、思考题

1、固定化细胞有何优点和缺点?

2、对细胞或者酶进行固定的方法还有哪些?

 

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