外植体的接种是把经过表面消毒后的植物材料切割或分离出器官、组织、细胞,转移到培养基上的过程。整个接种均需在无菌条件下进行操作,一切用具、材料、培养基、接种环境等都需要无菌。
1、无菌操作规程
无菌操作质量的高低决定了组织培养的成败,组培的工序中无菌操作的环节很多,材料切割、茎尖剥离、材料转接、封口等各个环节均要求规范、准确、迅速,任何一步做不好就会导致失败。
2、材料的分割、切割和接种
较大的材料肉眼观察即可操作分离,较小的材料需要在解剖镜下放大操作。分离工具要锋利,切割动作要快,防止挤压,避免使用生锈的刀片,以防止氧化现象产生。用灭菌过的器械,将切割好的外植体插植到培养基表面上。培养材料在培养容器内的分布要均匀,以保证必要的营养面积和光照条件。茎段基部插入固体培养基中,茎尖下端置于培养基表面,叶片通常将叶背接触培养基,这是由于叶背气孔多,利于吸收水分和养分的缘故。所有材料接种完毕,应做好标记,注明材料名称、接种日期等。
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