中华人民共和国国家标准

公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法

细 菌 总 数 测 定

GB/T 18204.4-2000

1 范围

本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具细菌总数的测定方法。

本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具细菌总数的测定。

2 引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB /T 18204.2-2000 公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定

3 定义

本标准采用下列定义。

细菌总数aerobicbacterialcount

指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等),25 cm²表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。

细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。

第一法 涂抹法

4 仪器

见GB/T 18204. 2-2000中第4章

5 培养基和试剂

见GB/T 18204.2-2000中第5章。

6 检验程序

见GB/T 18204. 2-2000中第6章。

7 操作步骤

7.1 采样方法

7.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。

7.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25cm²(5cm ×5cm)面积范围;床单、被单在上下两部各25cm²面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入10mL生理盐水内，4h内送检。

7.2 检验方法

7.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。

7.2.2 以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注人到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 mL加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。

7.2.3 将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃士1℃培养箱培养48 h.

8 菌落计数方法

作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数;若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。

公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式(1)计算:

M=k·n/2

式中:M— 细菌总数，cfu/25

     K— 稀释倍数;

     n— 平均菌落数。

9 菌落数报告方式

见GB/T 18204. 2-2000中第9章。

第二法戳印法

10 原理

用特制的内径为3.57cm 的培养皿，注入营养琼脂培养基，使其表面比皿边高2-3mm。采样时将培养基表面和被检物品表面吻合，轻轻按压3-4s，使其被检查物体表面能够均匀地与培养基表面接触。然后盖上皿盖，置恒温箱37℃培养24 h后，计数培养基表面(10cm,)生长的细菌菌落数。

11 培养基和试剂

11.1营养琼脂培养基

11.1.1成 分:蛋白胨   10g

            牛肉膏   3 g

            氯化钠   5 g

            琼脂     15-20g

            蒸馏水  1000 mL

11.1.2 制法:将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.4-7.6 ，过滤、分装于玻璃容器中，经121℃灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

12 仪器

12.1 高压蒸汽灭菌器

12.2 干热灭菌器

12.3 恒温箱。

12.4 冰箱。

12.5 特制戳印平皿(内径3.57cm),

12.6 制备培养基用的一般器材。

13 检验步骤

13.1 将溶化并冷至50-55℃的营养琼脂培养基，倾注于已灭菌的特制戳印平皿内(使皿内部培养基平面比皿边缘高2-3 mm)，每皿约10 mL，待凝固后，盖上皿盖(皿盖与培养基隔一定空间)，翻转平皿，在4℃下保存备用。

13.2 将被检物品放平，再将皿盖打开，放在被检物品表面上，用手轻轻按压3-4s，取下，盖上皿盖，置37℃恒温箱内，培养24 h后观察结果，计数细菌菌落数。

14 结果计算

用肉眼观察，点数培养基表面菌落数，其细菌总数为10cm,(每皿)表面积的菌落数。本法简 便易行、可靠，可直接采样做细菌培养。

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