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沙门氏菌检验(1)



录入时间:2010-9-19 14:41:12 来源:青岛海博

一、检验方法
 
检验步骤
  1. 前增菌和增菌。冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌,各称取检样25g,加在装有225mL缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器,以8000~10000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎;粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化,于36±1℃培养4h(干蛋品需培养18~24h),移取10mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内,于42℃培养18~24h。同时另取10mL,加入于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内,于36±1℃培养18~24h。
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g(25mL),加入灭菌生理盐水25mL,按前法做成检样匀液,取其半量接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内,于42℃培养24h;另半量接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内,于36±1℃培养18~24h。
    2. 分离。取增菌液1环,划线接种于亚硫酸铋琼脂平板和DHL琼脂平板(或HE、WS、SS琼脂平板)各一个。于36±1℃分别培养18~24h(DHL、HE、WS、SS)或40~48h(BS)。观察各个平板上生长的菌落。其菌落特征见表3-1。
挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂斜面,一般应多挑几个菌落,以防遗漏,沙门氏菌在三糖铁琼脂上与肠杆菌科各属可疑反应的鉴别见表3~2。
    3. 生化学鉴定。在接种三糖铁琼脂的同时,再接种蛋白胨水(供靛基质试验用),尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各一管,于36±1℃培养18~24h,必要时可延长至48h,按表3判定结果,如遇有非典型菌株,可根据情况补做有关生物化学试验,必要时进行各亚属的鉴定。
    4. 血清学分型。一般采用1.5%琼脂斜面培养物做玻片凝集试验。
(1)O抗原的鉴定:首选用A~F多价血清做玻片凝集试验,同时用生理盐水作对照,生理盐水自凝者不能分型。凡A~F多价血清呈现凝集者,可依次用O因子血清进行凝集试验,根据结果判定O群。如不被A~F多价O血清凝集者,可用57种或163种沙门氏菌因子血清中的7种多价血清检查,如有其中一种血清凝集,则用这种血清包括的O群血清逐一检查,以确定O群。如果由于Vi抗原存在而阻止O凝集时,可将菌苔用生理盐水作成浓菌液煮沸后再检查。
(2)H抗原的鉴定。根据所确定的O群,依次用H因子血清检查1相和2相的H抗原,对不常见的菌型,可先用多价H血清检查,如其中某种多价血清凝集时,则再用此血清所包括的H因子血清逐一检查,以确定第1相和第2相的H抗原,如无单因子血清时,要用两个H复合因子血清核对其检查的结果。如仅检出第1相或第2相时,可在琼脂斜面上移种1~2代后再检查,若仍为一相,要用位相变异的方法检查其另一相H抗原。
常用的位相变异试验方法如下:
小套管法:将两端开口的小玻管(下端开口要留一缺口,不要平齐)放在半固体管内,小玻管的上端应高出培养基的表面,灭菌备用。溶化琼脂冷至50℃时,挑取已知H因子血清1环,加入套管中的琼脂表面,于37℃培养,每日观察,另一相解离后可由套管外的半固体表面取菌检查。
U型管法:向0.4%琼脂培养基中加入适量血清,装入灭菌U形管内,管口塞棉塞,凝固后由一端接种细菌,经培养再由另一端取菌检查。
简易平板法:将0.7%~0.8%半固体琼脂平板烘干表面水分,挑取因子血清1环,滴在半固体平板表面,放置片刻,待血清吸收到琼脂内,在血清部位的中央点种待检细菌,培养后,在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。
(3)Vi抗原的鉴定:用Vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有伤寒沙门氏菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。
5. 菌型的判定和结果报告。综合以上生化试验和血清学分型鉴别的结果,按照沙门氏菌属抗原表判定菌型,并报告结果。

 

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