食品微生物检测实验室质量控制规范（6）
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附录A (规范性附录) （等同 EA-04/10 APPENDIX C）
参考培养物的一般性使用
来源于权威机构认可的参考菌株
禁止
参考原株
低温干燥，液氮储藏，超低温冷冻等
特定条件和被推荐的储存时间
在特定条件下保存
继代培养一次
解冻
工作菌株
特定条件和被推荐的储存时间
日常使用
* 同时进行合适的纯度检查和生化鉴定
上述过程的所有步骤都应形成文件，并保留所有步骤的详实记录
附录B （资料性附录）(USA/FSIS MLG CHAPTER 36)
仪器设备的校正、维护及使用验证
B.1 简介(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.1)
仪器设备的维护、校正及使用验证涉及到测试设备及分析仪器的标准，也包括了监测及控制环境条件如卫生、安全及废弃有害物的指南。在本方法中也涉及到分析食品中特定微生物、物种及残留物的质量控制参数。
食品微生物检验实验室的负责人保证参与实验操作的每个人的质量保证及质量控制程序一致。质量保证主管每年一次执行内部审核以确保程序的符合性。
必须记录与预期质量控制结果有出入的情况，并由负责分析的人员验证，需通知单位主管。不一致的地方要记录在日志里，并附上采取的矫正的措施。单位主管的责任是每周看一次日志。每天的验证记录指的是正常工作日，如果某一项仪器未被使用，标签与记录都要如此标示。非工作日（周末、假期）也要标注。
B.1.1设备手册(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.11)
a. 所有仪器设备手册要复印并且装订，存于容易取放的地方。
b. 本章没有涉及到的测试设备，要复印其操作程序、维护的说明书并放在设备附近。
B.1.2设备记录(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.12)
a. 每台仪器要配记录本并放在其附近。记录本的内容包括：设备名称、制造厂商、主机系列号或其他独特信息、收到及应用日期、放置地点、收到时的状态（新、旧、重新调试、）制造厂商的操作指南（复印件或其放置位置）、设备维护或校正的日期、维护细节及未来的维护计划、任何损伤、故障、修正、修理的记录。
b.有关仪器的每项操作都要记录在案，包括日期、事件、操作、使用人等。
c. 所有仪器记录本要在最后使用日期后保存3年。
B.2控温设备(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.2)
B.2.1 灭菌锅(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.21)
B.2.1.1 温度校正及验证
a. 所有灭菌锅在启用时校正，每日用温度计校正以保证其稳定性。
b. 为验证灭菌锅性能，每次灭菌时应记录温度、时间。
c. 记录表明灭菌锅的编号、日期、产品、运行号码、灭菌起止时间、在预定温度的时间。
d. 记录末端由操作员确定产品或物质的灭菌时间及温度符合标准程序。
B.2.1.2 操作
a. 操作手册、每类加工物质的灭菌程序、设备记录放在灭菌锅附近。
b. 温度敏感的灭菌带或类似物，放在所有灭菌锅容器内以证实操作有效。
c. 隔离手套或类似物要始终放在灭菌锅附近。
B.2.1.3 维护
a. 每台灭菌锅使用6个月后由专业人员维护。另外，每台灭菌锅每年要用认可的温度计进行温度确认实验及温度一致性检验。
b. 灭菌锅蒸气管的滤器要每周检查清洗。
c. 灭菌锅要保持干净，无残留物以保证最大热传导。
d. 日志为每台灭菌锅记录所有操作及温度验证。
e. 主管每周检查日志以确保记录准确、完整。
B.2.2 培养箱(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.22)
B.2.2.1 温度校正及验证
a. 每台仪器启用时校正温度的准确性及一致性。
b. 为验证仪器的性能，用专用设备（温度计等）每日上午、下午记录温度。
c. 不一致的温度要记录在日志上，并写明原因及采取的措施。
B.2.2.2 操作
a．培养箱要放在环境温度差异小的地方。
b．箱式培养箱温差范围±1℃，连续式培养箱温差范围±2℃。
B.2.2.3 维护
a. 每年清洁两次，防止霉菌或其他微生物累积。
b. 每年检查一次培养箱的垫圈、风扇等设施。所有的维护、修理记录在案。
c. 若需要加水以保持湿度，可加入非挥发性的微生物抑制剂，防止细菌生长，容器要每月清洗消毒。
B.2.3 水浴锅(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.23)
B.2.3.1 温度校正及验证
a. 每台仪器启用时校正温度的准确性及一致性。
b. 为验证仪器的性能，温度计要放在水浴锅上或加热槽上，记录使用时的温度。
c．水浴锅应有内置的水循环系统及盖子，温差控制在±0.5℃ 。每次使用时检查温度。
d．微生物学应用中的大多数加热槽有内置热循环仪，可调节温度从环境温度到115±0.5℃。加热槽的温度要每天测量记录。
B.2.3.2 操作
a．根据厂商的要求操作水浴锅或加热槽。
b．精确控温时，保证温度计不与仪器边缘接触。
B.2.2.3 维护
a．所有水浴锅每月至少清空清洁一次。
b．所有的维护、性能偏差及采取的相应措施要记录在案。
B.2.4 冰箱及冰柜(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.24)
B.2.4.1 温度校正及验证
a. 所有的冰箱及冰柜在安装时校正温度的准确性及一致性。
b. 为验证仪器的性能，分析人员每天用标准温度计测定记录温度。
B.2.4.2 操作
a．冰柜温度应保持在低于-10℃。
b．超低温冰柜温度应保持在低于-70℃或-90℃。
c．冰箱温度应保持在2~8℃
B.2.4.3 维护
a. 每台冰箱、冰柜的门垫圈、风扇每月检查一次，配备日志。日志记录预定的维护日期、遇到的问题及采取的措施。
b. 冰箱、冰柜至少每年一次除霜、清洁、消毒。
c. 以下程序适用于超低温冰箱，但不排除针对个别冰柜加入其他的清洁/维护措施：
1. 空气滤器/盘管每季度检查清洁一次。
2. 应及时清理门垫圈及封条上的冰。应更换冰霜覆盖了三十天内的封条。
3. 只有在冰箱修理时才进行盒子内部的除霜及清洁工作。
B.2 5 干燥箱(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.25)
B.2.5.1 温度校正及验证
a. 所有的干燥箱在安装时校正温度的准确性及一致性。
b. 为验证仪器的性能，分析人员每天或在使用时用认可的仪表测定记录温度。
B.2.5.2 操作
a．干燥箱内的物品要分隔好以保证热穿透性好。
b．按照厂商的说明操作。
c．随时至少放一付隔热手套或类似物在干燥箱附近。
B.2.5.3 维护
a. 干燥箱至少每年清洁消毒一次。
b. 干燥箱全部的状况（乳门垫圈，门插销、加热棒等）每年检查一次。
c. 所有的维护、性能偏差及采取的相应措施要记录在案。
B.3 测量设备(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.3)
B.3.1 实验室天平的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.31)
a. 所有的天平每年用经认可的标准砝码校正。
b. 为验证仪器性能，使用前用单个砝码在指定范围内测定质量记录数据。
B.3.1.1 操作
a. 天平要放在坚固的表面上，避免倾斜及震动。
b. 天平和任何其他的称重设备及附件要放在干净、干燥的地方。这点对于分析天平尤为重要。
c. 蒸发皿或特殊称量纸可用于称重。避免溢出及形成气溶胶。
d. 所有的天平，其尖端负荷及分析，对于预计的目的是敏感度适当的。
e. 若天平配有矫正仪，在使用前确保天平处于水平。
B.3.1.2 维护
a. 所有的天平每年至少进行一次专业清洗，并每年用认可的标准砝码校正。
b. 天平每次使用后要清洁。
c. 日志为每台天平记录日常使用情况、所有的清洁、维护、性能偏差及采取的矫正措施。
B.3.2酸度计的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.32)
a. 为验证酸度计的性能，每天用标准缓冲液校正。若一天内间隔用酸度计读数，每次使用前用新配制的缓冲液重新校正。
b. 用包括测试物质的pH范围的两种标准溶液校正仪器。（如pH4.0和7.0以及pH7.0和10.0。
c. 确保应用前，能按照厂商说明书中提到的校正可接受的标准，记录所有的校正信息。
B.3.2.1 操作
a. 用于校正的部分缓冲液使用后丢弃。
b. 校正温度要接近于测试溶液的温度。测定pH的理想温度范围是20-30℃。利用温度补偿计较好，或根据厂商说明进行温度校正。
c. 参考缓冲液要标记上鉴定编号，收到日期及终止日期。
B.3.2.2 维护
a. 所有的酸度计每年由专业人员保养。校正/保养证书是必要的。
b. 每次使用后清理电极。电极按照厂商说明保存。电极切勿干燥。
c. 每台酸度计配有日志。日志记录每次使用、变换电极或缓冲液及保养的日期。仪器性能偏差及采取的矫正措施要记录在案。
B.3.3水活性（aw）的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.33)
按照厂商操作手册的说明进行校正、维护及测试实验。
B.3.3.1 操作
a. 测试方法及程序参考USDA FSIS 《Microbiological Laboratory Guideline（3rd ,1998）》中的第2章。
b. 温度在测定aw时很重要，温度的微小变化会引起蒸气压的较大变化。因此，仪器、参考盐溶液以及样品应保持同一温度。
c. 测完后，样品不应留在仪器中。上样时应避免滴入仪器中。
d. 为确保读数准确，上样体积不应超过一次性杯子的一半。
e. 在放入仪器之前，将杯子边缘的样品擦掉以防污染。若有溢出，需擦掉并重新校正仪器。
B.3.3.2 维护
a. 按照说明书，水动力学工具的传感器应至少每年检查一次。任何时候，若标准盐溶液的测定值与预期值相差很大，检查传感器。若有问题，丢弃不用或者返回厂家重校。
b. 保存日志，记录使用日期，所有的维修，标准盐溶液的读数，所有的性能偏差及采取的矫正措施。
B.3.4微量加样器的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.34)
a. 加样体积每月用质量/体积测定方法校正。以下为如何满足质量/体积标准的例子。
单容量加样器 在特定体积（μL）5次/mg。
多容量加样器 在低，中，高体积（=20，50，100%最大体积）吸5次。记录每次测定的平均值。
多通道加样器 直观的检查放落，读取累积数据。5次（在20，50，100%最大体积）。
b. 若性能验证失败，按照厂商说明书重新校正或返回厂商重新校正。
B.3.4.1 操作
a. 微量加样器是精密仪器，小心使用和维护。
b. 按照厂商说明书使用。
c. 选择合适的加样器和吸管头组合。
B.3.4.2 维护
a. 保持加样器清洁，按照厂商说明书保存。
b. 记录所有的维护、保养、校正及验证测试。
B.3.5自动水泵/清洗设备/管形瓶填充物的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.35)
a. 若仪器用于分配指定体积，在安装时用质量/体积测试方法进行校正。
b. 若取得体积一致，则通过每天的校正进行性能验证。若体积有变化，必须每次使用时进行性能验证。
B.3.5.1 操作
a. 若使用无菌介质，确保整个填充过程使用无菌操作技术。
b. 用铝箔或类似物包裹灭菌物品。
B.3.2 维护
a. 所有设备每次使用后清洁消毒。
b. 仪器的所有设备状况（如开关，轴，软管等）每年检查一次。所有的维护观察、性能偏差及采取的矫正措施记录在日志里。
B. 4显微镜的校正及验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.4)
所有的显微镜安装时进行测微尺验证，或要求供应商提供技术支持。
B. 4.1 操作
在使用及调整显微镜时按照厂商的说明书进行。
B. 4.2 维护
a. 每台显微镜每年由专业人员保养一次。
b. 每次使用后清洁目镜及物镜。
B. 5 自动化设备(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.5)
a. 无人指导的操作，更需要每次按照仪器使用、维护、校正说明书进行操作。
b. 每台仪器按标准程序进行操作，保证仪器正常使用的维护及校正是必要的。
B.5.1分光光度计的校正及验证
a. 所有的分光光度计在安装时进行波长的校正。
b. 为验证仪器性能，每天或每次使用前记录空白对照的光吸收。
B.5.1.1 维护
根据厂商的建议清洁分光光度计。
B.5.2 液体比重计的校正
每年用化学复合物校正。
B.6 层流罩/生物危害柜/安全柜的校正与验证(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.6)
a. 生物安全柜在安装时及每年一次的保养。
b. 为验证仪器性能，每次使用时利用开放培养基为对照检查无菌性。除此之外，用适当的监控器每月检查系统。
B.6.1维护
a. 每年保养一次层流罩//安全柜。
b. 每次使用后清洁消毒。
B.7 离心设备(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.7)
a. 专业技术人员每年保养离心设备。实验室每月清洁消毒离心机。
b. 超速离心机的转子每年维护一次。
B.8 参考标准的跟踪测定及校正(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.8)
设备 要求 频率
校正温度计* 校正标准重验证 5年一次
参考热电偶 沸点及冰点 1年一次
工作温度计 校正标准示踪校正 1年一次
工作热电偶 校正标准示踪校正或参考热电偶 1年一次
砝码* 校正标准砝码的重验证 5年一次
天平 校正标准示踪校正 1年一次
定时器 国家标准 1年一次
玻璃定量容器 质量，示踪校正标准砝码 1年一次
灭菌锅 示踪温度计或热电偶校正标准 1年一次
*所有温度计及砝码的校正参考国家/国际标准，如NIST或者SI。
B.9 微生物学补充用品(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.9)
B.9.1 消耗品
微生物学的消耗品包括在测试方法中应用，用后即丢弃的物品，包括但不局限于一次性吸管头、培养皿、解剖刀、称量纸、包装袋以及在测试中用到的其他物品。这些物品必须干净、无菌、精确。实验室可通过厂商的说明书满足要求。实验室要保存这些证书。
B.9.2 可重复使用产品
实验室的可重复使用产品指在检验分析中应用，随后清洗灭菌可继续使用的物品。包括但不局限于玻璃管、试管、手套、塑料服装、不锈钢仪器、搅拌机、刀等其他物质。经清洁、灭菌的物品要做好标签，切割器具可在用前清洗、烧烤、灭菌。
B.9.3 参考培养物（材料）
被鉴定的参考培养物（CRC）必须可溯源至国家或国际公认的模式菌株收藏中心（如ATCC）。来源于实验室的参考培养物（RC）必须对照着标准参考菌株进行鉴定，应保证以上参考培养物有完整的生化活性和生理特征。所有的CRC和RC从原始菌株转接次数不得超过5次。第5次转移后，实验室要从模式菌株收藏中心购买新的参考培养物，或使用国家或国际公认的参考菌株重新鉴定培养物的生化、生理学特性。另一种方法是，典型培养物可以生长，然后冷冻干燥或冷冻保存以周期性应用，这样可以延长重新购买或者重新鉴定的期限。保存菌株培养物需按照特定程序进行。为了质量控制，传代次数不能超过5次。可以应用可溯源至ATCC的商业冻干菌株。应详细记录每批培养基的鉴定及用此培养基分析样品的情况。
B.9.4 蒸馏水（实验室纯度级）
a. 只有去除痕量溶解金属、细菌、抑制化合物的水方可用于配制培养基、试剂及稀释空白。无抑制剂的水被称为微生物适用水。以下的实验可确保水无抑制剂。
下列参数的记录要保存：
每周测定（或使用前测定）：25℃大于1.0兆欧姆/cm的电阻。
每月测定：所有残余氯小于0.01mg/L；
菌落总数小于1000cfu/ml
每年测定：重金属（Cd，Cr，Cu，Ni，Pb，Zn，）单独小于0.05mg/L。
重金属总量小于10mg/L。
b. 蒸馏器根据厂商建议清洁。
B.10 实验室维护要求(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.10)
B.10.1工作台面
a. 测定样品或开始工作前，必须用我国卫生部门和我国环保机构认可的清洁剂（消毒剂）彻底清洁台面。工作结束（样品制备、接种、转移）或当天工作结束后，台面再清洁消毒。
b. 处理致病性物质时，用70%的乙醇，70-90%的异丙醇或EPA认可的商业消毒剂，根据厂商建议浓度使用。若有被肉毒梭菌（Clostridium botulinum）污染的可能性，调节70%的乙醇或者次氯酸盐溶液调节pH至11.0。
c. 在做抗生素残留测试的地方，只用普通酒精避免酚或次氯酸盐溶液的随机污染。
B.10.2生物危害性物质
a. 所有物质用后立即置于厂商建议浓度的消毒液中，或直接扔到危害袋中。所有物质在121℃持续灭菌至少45分钟。
b. 灭菌后丢弃所有器具。应符合我国的环保法规。
B.11 非一致性的设备(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.11)
所有的设备要正确维护。任何仪器，若出现过量或者错误操作，或者测定结果可疑，或者仪器缺陷，都应不被使用。设备应及时检定，若有可能，应放在特定地方，直到修理好，其校正、验证实验及测试实验表现正常。实验室应检查该项目在以前的测试结果中的缺陷问题。
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