日本灾后卫生检验产品-霍乱大肠杆菌分离培养基

一、构成（每升培养基）

酵母提取物…………………………………5g

细菌用胨……………………………………10g

硫代硫酸钠…………………………………10g

柠檬酸钠……………………………………10g

牛胆汁酸……………………………………8g

蔗糖…………………………………………20g

氯化钠………………………………………10g

柠檬酸二铁…………………………………1g
溴百里酚兰（BTB溶液）……………………0.04g

TB溶液 ………………………………………0.04g

琼脂……………………………………………14g

 

二、制作方法

将88g本品溶解在1L纯净水中，制成悬浮液，并加热至沸腾，然后将琼脂完全溶解其中。注意，本培养基不可经过高压蒸汽杀菌。冷却至50℃后，分别盛在浅盘里。

 

三、用途及特点

Kobayashi、enomoto、sakazaki和kuwahara等以nakanishi的选择分离琼脂培养基为基础，开发出了TCBS培养基。

本培养基的构成与kobayashi等的构成基本一样，但包含了经过特殊处理的牛的胆汁，改良了kobayashi与nakanishi等指出的不足。

由于本培养基的构成复杂，因此很难维持统一的发育标准。通过几个调查发现，不同厂家制造的TCBS培养基之间存在差别，不稳定因素。

通常，抑制肠内细菌的同时，对其部分同类不产生抑制的行为非常重要，因此，来自生产公司的质量管理显得尤为重要。West等试验证明，oxoid公司的TCBS培养基基本可以满足他们的产品标准。

WHO设定了由TCBS培养基中检出Vibrio类的最低适用标准。

本培养基适合vibrio choleae、v.parahaemolyticus等几乎所有vibrio类的发育。

几乎所有粪便中的肠内细菌都可以被抑制24小时。Proteus类以及streptococcus faecalis稍微有些发育，但是很容易区分出这些菌落与vibrio类菌落的不同。

本培养基不需要任何添加物或者血液无菌添加。因此，比起灭菌后仍需添加物的硫酸lauryl亚碲酸琼脂培养基，本培养基有很多优点。另外，比起亚碲酸培养基，本培养基具备适合vibrio类菌发育的特点。本培养基在阻止vibrio类菌之外的细菌发育的同时，在35℃环境下培养一晚可以促进病原弧菌属的迅速发育。从化学环境中分析其他vibrio类需要在更低温20~30℃的环境下培养。

TCBS培养基上成长的菌落形态

35℃环境下培养24小时后

一部分的aeromonas hydrophila发育成长为黄色菌落，而plesiomonas shigelloides通常通常情况下不发育。

方法

在本培养基表面涂抹粪便，或者由增菌培养基（如碱胨水）中涂抹。如果是临床检验，需要在35℃下培养18~24小时，如果是环境材料，需要在稍微低温环境下培养。

本培养基的培养结果显示，观察由培养器中取出的试验品，发现黄色的菌落就是弧菌群。例如，如果将v.chorela在室温下放置，会变回到绿色。

保存方法和使用期限

保存在30℃的干燥环境下，在使用期限内使用。制作的培养基需要保存在2~8℃温度下。

 

四、质量管理

阳性控制

Vibrio furnissii nctc 11218（非病原性）

阴性控制

Escherchia coli atcc 25922

 

五、注意事项

TCBS培养基上的各种vibrio类的鉴别属于推测，为了进一步证实，需要进行追加试验。

TCBS培养基上的黄色菌落不能进行氧化酶生化反应。由TCBS培养基钓菌出来的菌落有粘稠性，很难发生滑动凝集反应。进行滑动凝集反应之前，需要进行普通琼脂培养基的二次培养。