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BP培养基经不同条件贮存后对金黄色葡萄球菌检测结果的影响



录入时间:2010-9-14 15:09:36 来源:中国卫生检验杂志

国标中规定,BP培养基(BP皿)制备后于冰箱内保存48h内使用,而在实际工作中较难做到,由于工作量不确定,配制量很难掌握,而且要频繁的制备,给工作带来不便,为保证工作质量,提高工作效率,减少浪费,我们经不同温度、时间贮存后的BP平皿对金黄色葡萄球菌检测效果进行了实验观察,现将结果报告如下: 
1 材料与方法
1.1材料
BP干燥培养基由北京陆桥技术有限公司生产,金黄色葡萄球菌( 25923) 由ATCC提供。 
1.2 方法
实验用菌株接种肉汤培养复苏后备用,在测定时进行10倍递增稀释,使每ml细菌在2000个左右,将按常规法配制倾注的BP皿,放入平皿筒中放冰箱( 4℃-8℃) 简称“冰筒”、  放入平皿筒中放室温(4℃-8℃)简称“室筒”、直接放冰箱 (4℃-8℃)简称“冰散”和直接放室温(4℃-8℃)简称“室散”贮存,对经上述条件不同时间贮存后的BP平皿,分别用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液,密划,经37℃培养24h,观察金黄色葡萄球菌的菌落大小、色泽等,并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数);将BP培养基配制于三角瓶中(不倾注平皿),放冰箱(4℃-8℃)保存不同时间后,再进行溶解,倾注平皿后用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液,密划,经37℃培养24h,观察菌落生长情况并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数)。对照用BP培养基及菌液均系当天配制及稀释。 
2 结果
2.1   BP平皿经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
BP平皿置冰箱、室温后在不同时间内接种金黄色葡萄球菌,置37℃培养24h后计数菌落数, 结果见表 1 。 
2.2  BP培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
BP培养基配制后于三角瓶中放置,经贮存不同时间后倾注BP平皿,然后接种金黄色葡萄球菌,置37℃培养24h后计数菌落数,结果见表2 。 
表 1  BP平板经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
 
BP平板贮存时间(d)
金黄色葡萄球菌检出数
对照
冰筒(%)
冰散(%)
室筒(%)
室散(%)
当天
202
203(100.5)
202(100.0)
1
198
198(100.0)
197(99.5)
197(99.5)
195(98.5)
2
213
213(100.0)
212(99.5)
204(95.8)
190(89.2)
3
208
207(99.5)
204(98.1)
186(89.4)
164(78.8)
4
212
210(99.1)
205(96.7)
158(74.5)
147(69.3)
5
205
201(98.0)
194(94.6)
127(62.0)
106(51.7)
6
210
204(97.1)
195(92.9)
110(52.4)
84(40.0)
7
207
197(95.2)
187(90.3)
88(42.5)
60(29.0)
10
203
170(83.7)
150(73.9)
42(20.7)
21(10.3)
14
200
141(70.5)
120(60.0)
19(9.5)
7(3.5)
21
201
88(43.8)
59(29.4)
3(1.5)
1(0.5)
 
表2  B P培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
BP培养基贮存时间(d)
金黄色葡萄球菌检出数
对照
检出数(%)
5
205
204(99.5)
10
203
202(99.5)
15
212
210(99.1)
20
199
196(98.5)
25
208
200(96.2)
30
204
194(95.1)
 
3 讨论
实验结果表明,倾注平皿后的BP培养基放置平皿筒中置冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存和直接放冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存,前者贮存4d,对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99%以上),贮存7d,检出率仍达95.2%,贮存10 d,检出率明显下降至83.7%;而后者贮存2d,对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99%以),贮存7 d,检出率下降至90.3%,这一结果与国标法规定BP培养基在倾注平皿后宜在当天使用或冰箱48h内使用的观点趋向一致,而前者的结果比国标规定的使用时间延长了许多,说明B P平皿在冰箱贮存时包装的重要性。由于国标法规定在冰箱内贮存未指明BP平皿的包装条件,因此可理解为在无外包装条件下直接放置。本次结果也基本上印证了这一点。把BP平皿放入平皿筒( 没有的也可用纸包起来再套上塑料袋)中贮存,可能减少了培养基中有效成份的挥发,从而延长了保存期。而将倾注平皿后的B P培养基放置平皿筒中置室温( 18℃-22℃)条件下贮存和直接放室温(18℃-22℃) 条件下贮存, 前者贮存1 d后对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达9 9%以上),贮存2d后,检出率下降至95. 8%,贮存3 d后检出率更是下降至89.4 %,而后者贮存1d后检出率达到98.5%,贮存2 d后就明显下降至89.2%。从第2天起,放室温的检出率明显低于放冰箱的,这可能是因为在室温贮存温度较高,湿度也不好控制,使培养基中的水分和有效成份挥发的较快,从而影响了保存期。说明这种方法贮存BP平皿是不可取的。 
 
将BP培养基配制于三角瓶中放冰箱( 4℃-8℃) 贮存,临用时加热溶解倾注平皿,贮存至30d后,金黄色葡萄球菌的检出率仍达到95.1%,这一结果表明,影响金黄色葡萄球菌检出率主要是由于BP平皿表面有效成份的挥发。因此控制有效 成份从表面挥发是适当延长 B P平皿保存期的主要关键,最简单的方法就是用三角瓶配制好后贮存于冰箱中( 4℃-8℃),  临用时加热溶解倾注平皿,即省事又减少浪费。 
 
通过本次调查,发现完全可以延长BP培养基的保存时间,BP平皿放平皿筒中( 或用纸包严后套上塑料袋) ,于冰箱( 4℃-8℃)内可贮存7 d左右。配制在三角瓶中于冰箱内( 4℃-8℃)可贮存至30 d 。另外贮存的BP平皿应适当倒得厚一些,以免倒薄了时间长了发生干裂, 影响试验结果。 

 

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