第三节 玻璃化问题及其防止
一、玻璃化现象
定义：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明状，呈水迹状，这种现象通常称为玻璃化。
危害：
①使试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。玻璃化为试管苗的生理失调症。
②出现玻璃化的嫩茎不宜诱导生根，因此使繁殖系数大为降低。
③呈现玻璃化的试管苗，其茎、叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽。这种情况主要是由于培养容器中空气湿度过高，透气性较差造成的。
在不同的种类、品种间，试管苗的玻璃化程度也有所差异，当培养基上细胞分裂素水平较高时，容易出现玻璃化现象。在培养基中添加少量聚乙烯醇、脱落酸等物质，能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生。
二、防治措施
（1）增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势；
（2）减少培养基中含氮化合物的用量；
（3）增加光照；
（4）增加容器通风，最好进行CO2施肥，这对减轻试管苗玻璃化的现象有明显的作用；
（5）降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化的现象发生；
（6）降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。
第四节 其他常见问题和解决措施
一、初始培养阶段
1、培养物水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯
可能原因：表面杀菌剂过量，消毒时间过长，外植体选用不当（部位或时期）。
改进措施：调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间，试用其他部位，生长初期取材。
2、培养物长期培养几乎无反应
可能原因：基本培养基不适宜，生长素不当或用量不足，温度不适宜。
改进措施：更换基本培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用2，4-D，调整培养温度。
3、愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状
可能原因：激素过量，温度偏高，无机盐含量不当。
改进措施：减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当提高琼脂用量增加培养基硬度。
4、愈伤组织太紧密、平滑或突起，粗厚，生长缓慢
可能原因：细胞分裂素用量过多，糖浓度过高，生长素过量。
改进措施：减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度。
5、侧芽不萌发，皮层过于膨大，皮孔长出愈伤组织
可能原因：枝条过嫩，生长素、细胞分裂素用量过多。
改进措施：减少激素用量，采用较老化枝条。
二、继代培养阶段
1、苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高
可能原因：细胞分裂素用量不足，温度偏高，光照不足。
改进措施：增加细胞分裂素用量，适当降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代。
2、苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，苗丛密集，微型化
可能原因：细胞分裂素用量过多，温度不适宜。
改进措施：减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。
3、分化率低，畸形，培养时间长时苗再次愈伤组织化
可能原因:生长素用量偏高，温度偏高。
改进措施：减少生长素用量，适当降温。
4、叶粗厚变脆
可能原因：生长素用量偏高，或兼有细胞分裂素用量偏高。
改进措施：适当减少激素用量，避免叶片接触培养基。
5、再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定芽分化出来
可能原因：细胞分裂素用量偏高，或表明该种植物适于该种再生方式。
改进措施：适当减少细胞分裂素用量，或分阶段地利用这一再生方式。
6、丛生苗过于细弱，不适于生根或移栽
可能原因：细胞分裂素浓度过高或赤霉素使用不当，温度过高，光照短，光强不足，久不转移，生长空间窄。
改进措施：减少细胞分裂素用量，免用赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转接，降低接种密度，更换封瓶纸的种类。
7、幼苗淡绿，部分失绿
可能原因：无机盐含量不足，PH值不适宜，铁、锰、镁等缺少或比例失调，光照、温度不适。
改进措施：针对营养元素亏缺情况调整培养基，调好PH值，调控温度、光照。
8、幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中
可能原因：瓶内气体状况恶化，PH值变化过大，久不转接导致糖已耗尽，营养元素亏缺失调，温度不适，激素配比不当。
改进措施：及时转接、降低接种密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内气体状况，控制温度。
三、生根阶段
1、培养物久不生根，基部切口没有适宜的愈伤组织
可能原因：生长素种类、用量不适宜；生根部位勇气不良；生根程序不当；PH值不适，无机盐浓度及配比不当。
改进措施：改进培养程序，选用适宜的生长素或增加生长素用量，适当降低无机盐浓度，改用滤纸桥液培养生根等。
2、愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合。
可能原因：生长素种类不适，用量过高，或伴有细胞分裂素用量过高，生根诱导培养程序不对。
改进措施：调换生长素种类或几种生长素配合使用，降低使用浓度，附加VB2或PG等减少愈伤，改变生根培养程序等。
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