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《水生微生物实验法》——从水、泥和生物体中分离酵母菌



录入时间:2010-9-13 13:57:11 来源:青岛海博

 

水生酵母菌具有多方面的用途,可作为饵料,发展水产养殖业,近年来用它作为轮虫、丰年虫和鱼虾幼苗的饵料,其效果都很好;具有同化多种烃类化合物的能力,因此从海洋酵母菌中筛选石油酵母是一条重要途径:同时能合成分泌维生素和分解多种物质,参与了无机物和有机物的转化过程。海洋酵母的分布很广。在远近深浅的海水、海泥、海洋动植物体表及海洋动物的胃肠中都有,甚至在远离沿岸的海洋空气中也发现有酵母菌。因此,分离海洋酵母菌的样品可来自多方面,则其分离方法也有多种.

1 .培养基成分及配制

1)葡萄糖蛋白胨培养基:

葡萄糖2

蛋白胨1

酵母膏0.5

琼脂2

过滤的海水1000 毫升

将上面物质溶于水中,调pH 4.5,112 蒸汽下灭菌20 分钟.本培养基适用于分离海洋酵母。

2)豆芽汁乳酸蔗糖培养基:

蔗糖2

乳酸0.5

琼脂2

黄豆芽10

陈海水或蒸馏水100 毫升

取新鲜豆芽10 放烧杯中.加陈海水或蒸馏水100 毫升.煮沸30 分钟,用纱布过滤,再加蔗糖,乳酸和琼脂,加热溶匀,补足失水量。

3)麦芽汁琼脂培养基:麦芽汁(7 波美度)98 毫升,加琼脂2 ,青霉素G 钾盐40-60毫克,或加500 -1000单位的链霉素即成。

2 .从海水、淡水中分离酵母菌

水中酵母菌密度较低,一般不用稀释法,而是用浓集法分离。

1)用无菌采水瓶从三个特定站位取一定量的水样各2 瓶(近岸取100 毫升.远岸取500-1000毫升),立即分别通过硝化纤维滤膜(孔径0.2-0.6 微米)浓集酵母菌。

2)取下滤膜,分别紧贴于上述三种预先编号的平板培养基上。

3)重复第(2)步骤,再分离一组3 个平板(编相应号码)。

④ 将平皿倒放于24 下培养5-7 天,(如果是河口区水样品应放于37 培养3-5 天)后,观察其形态,记录其数量,如菌群不纯,挑取菌落用划线法分离,直到纯化.而后接种于斜面,待用.

3.从海泥或池泥中分离酵母菌

1)取2 厘米3泥样,溶于10 毫升无菌海水(或无菌水)中振荡成悬浮液。

2)待粗粒泥沙下沉后,取三次上清液各1 毫升,分别放于3 个编号的无菌培养皿中,重复这个步骤,再做一组3 个平板,编相应号码。

3)将融化的上述三种培养基冷至45 分别倾入培养皿中,立即摇匀。

4)冷后,于24 下培养5-7 天,观察其形态、记录其数量。若不纯,可挑取菌落用划线法分离,直到获得纯菌落,而后接种于斜面培养基,供鉴定研究。

4 .从海藻体上分离酵母菌

5 鲜藻放入100 毫升无菌海水中.加玻璃珠振荡10分钟,静置,取上清液用超滤膜法分离。

5 ,从海洋动物体表分离酵母菌

用较大的水生动物表皮三块或小动物三只,直接于上述三种平板培养基上划线,在24 下培养5-7 天.观察形态,记录数量.若菌落不纯,可用划线法或稀释法再分离,待得到纯菌落后,接种于斜面,待用。

6 .从海洋动物消化道内含物中分离酵母菌

直接取少量内含物在平板培养基上划线,方法同5 。

 

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