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《水生微生物实验法》——着色菌属或称红硫菌属的分离与纯化培养



录入时间:2010-9-10 15:34:16 来源:青岛海博

 

(十五)着色菌属或称红硫菌属的分离与纯化培养

着色细菌与绿菌属一样也是光合细菌,但它们除了含有叶绿素外,还含有胡罗卜素,而且后者占优势。其细胞除球形外.有柱状,偶有弯曲有荚膜及极生鞭毛,能运动,细胞团块呈深浅不一的红色或紫红色。在有硫化氢条件下生长时,能氧化硫化氢与硫,累积硫于细胞内,而绿色硫细菌却沉硫于细胞外。分布在有腐烂藻类植物的海泥和淡水泥中。

1 .分离培养基成分及其配制

由于此种完全培养基的有些成分不能在高压灭菌.或在高温下不相容必须先制备好基础培养基,然后把其他成分的无菌溶液加到冷基础培养基中。

1)基础培养基

NH4Cl    0.1

KH2PO4    0.1

MgCl2    0.05

NaCl   海生种30

淡水种10

琼脂     20

    925毫升

溶解以上无机盐于水中,加入琼脂,加热至121 15分钟,使琼脂溶解,分装于试管或螺旋口瓶里.121 蒸汽下灭菌15分钟。不加琼脂可作为液体培养基。

2)无菌碳酸氛钠溶液:将NaHCO3  5加水至100 毫升,在121 蒸汽下灭菌15 分钟。

3)无菌硫化钠溶液:此液既作为HS-的来源,又起脱氧剂作用,若是预先配制,必须把它保存在没有氧的密闭容器里,否则应在临用前配制。

Na2S·9H2O 5加水至100 毫升,在121 蒸汽下灭菌15分钟.

4)完全培养基:

基础培养基(融化冷至45    10毫升

NaHCO3溶液   0.4毫升

Na2S·9H2O    0.2 毫升

依次无菌地如到基础培养基中,混匀后可用。

2. 分离与纯化培养

1)分离培养:在广口玻璃瓶底放一层0.5-1厚的混有腐烂海藻的海泥,用海水覆盖,暴露于光下。直至培养器最靠近光源的壁上长出红色菌为止。这些红色生长物通常含有着色菌.它的生长决定于泥中硫酸盐的还原,和随后释放的H2S 。

2)纯化培养

① 深层试管法:

a 、选取具有着色菌特征的红色生长物(已用显微镜检查过细胞形态),放于一定量的完全培养液中,混匀。

b .准备一系列深层融化的完全培养基管,并保存在45 水溶中,将混匀于培养液中的生长物稀释成一系列稀释度。

c .每支试管用经160 灭菌1 小时的固体石蜡和液体石蜡1:1 的混合物覆盖,每管盖2 厘米高。

d .曝光于25-28 下培养,3-7 天后完全分开的红色菌落出现在较高的稀释度里。选择一支合适的试管培养物表面灭菌,切断玻璃,移去管子,然后在无菌的培养皿里,以无菌操作法把菌落解剖出来。

e. 在无菌的完全培养基里乳化菌落,并在一系列稀释度中重复以上操作培养,保证纯度。

纯培养物可在这些深层琼脂里保存,2 个月移种一次。

② 琼脂培养基划线法:将红色生长物在完全培养基平板上划线接种,于厌氧条件下曝光25-28,培养4-7天.挑出典型菌落,重新划线培养,直到纯化为止。纯化后可保存在深层完全培养基中.

 

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