无菌操作

（一）船上微生物实验室、无菌室及其器具

海洋、港湾和江河中的微生物调查研究，需要专用的调查船，要求船上有专用的实验室。由于水样的处理、现场记录的整理等等需要在室内进行，因而要有适当大小的实验室。室内要有交流电源、供水系统和必要设备。如冰箱、恒温培养箱、真空抽气泵、电炉、小型的无菌箱和高压蒸汽锅．以及器具〔见下节的（一）〕 ．

无菌室是供上岸时实验用的。室内要求整洁，有过滤空气装置，应无灰尘和基本无菌，室内应有二道门，门上应挂布帘，预防人进入时空气直接通入室内。如果室内无过滤空气的装置，室内应安装紫外灯杀灭空气中的微生物（或用化学药物），室内同样要有交流电源和必要的器具和设备，

 

（二）基本操作技术

微生物的每一个实验研究工作都必须应用无菌操作技术。主要是采用焚烧灭菌——干热灭菌原理，及应用已灭菌的器具、药物、培养基，使在微生物的接种、分离、冲稀等工作中不致染杂菌，有助于实验目的的实现．

 

1 ．斜面接种法

（1）取无菌斜面培养基试管贴上标签，编号，注明接种菌的菌名，接种日期，接种人的姓名等。

（2）点燃酒精灯或煤气灯，以下的操作．尤其是试管的菌种都要始终在火焰边进行．

（3）将菌种和斜面培养基的两支试管放在左手拇指和其他四指上．使中指在两试管之间．斜面向上，管口向外，成水平状态，也可将两试管放在左手掌中央，用手指托住试管

（4）用右手将棉花塞拧松，以利接种时拔出。

（5）用右手拿接种环柄，使接种环垂直在火焰上．将环的部分烧红灭菌，环以上部分，在接种时进入试管的一段也应在火焰上烧过灭菌．

（6）用右手的小指、无名指和手掌拔取棉塞，切勿将棉塞放在桌上，应始终夹在手中。

（7）灼烧试管口，并靠手腕动作不断地转动试管口，借以烧死粘染的微生物。

（8）将烧过的接种环伸入菌种管内，接触一下没长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死接种菌体。而后轻轻地挑取菌苔少许，慢慢地将接种环抽出试管，注意不要使环的部分碰管壁。取出后不可使环通过火悄了以免把苗烧死或引起变种．

（9）随即将接种环伸进手中的另一试管，在培养基上轻轻地划直线或波线接种。划线时要从底部到顶部，即由下而上，不要把培养基划破，也不要使菌种沾污管壁。

（10）再灼烧管口后，塞上棉塞．塞棉塞时不要甩试管去迎棉塞，以免移动试管时纳入不清洁的空气而染菌。

（11）将接种环再灼烧，杀死环上的残菌，以免污染。尤其是对病原菌，此项操作更为重要，反之就有致病的危险。最后用右手塞紧棉塞。

 

2 ．液体培养基的接种用滴管或移液管接种时，应事先灭菌好，不能将滴管或移液管在火焰上灼烧，只能使滴管或移液管在火焰上通过1-2 次，接触菌液部分，在通过火焰时应缓慢些，使沾染管表面上的微生物杀死．但不能太慢，以免受热膨胀而改变容量。接种量为0.1毫升．其他步骤参照斜面无菌接种法。

 

3 ．穿刻接种

接种前后对接种针及试管口的处理同斜面接种法，接种时将挑有接种物的接种针，从半固体培养基中央直刺至离管底一厘米左右．成一直线后立即从原刺线退出。刺入或退出时，均不可使接种针左右摇动 .