1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖 1克，酵母膏1克，碳酸钙1克，琼脂2.5克，水100毫升

 

2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用

 

3.  Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)

Glucose (葡萄糖) 100g

Yeasst extract (酵母膏) 10g

CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g

Distilled water (蒸馏水) 1000ml

Adjust (调) pH to 6.8

适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种

 

 3．1 斜面培养基　　

葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面，

 

3．2 液体增殖培养基　　

葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL 0.1MPa灭菌20min。

 

3．3 醋酸菌种的制备　　

扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。

 

3．3．1 安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次

 

3．3．2 菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。

 

3．3．3 三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h，

 

3．3．4 种子罐培养基同前 配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精，无菌操作接入菌种。接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定

 

3．3．5 每次接种前，先将菌种进行外观观察 。有异样情况者，作涂片、染色、镜检观察，菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检2—3个样品，在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。培养醋酸菌时，需要用含糖或酵母膏（维生素B）的培养基，在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源，对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用，不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢，一般为形态近于球菌的短杆菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖，增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-，老龄细胞呈可变性，因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。

 

醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭。感官判断类似于一种丁香成分，和纯醋酸的嗅感不同。防止方法不外呼改善工厂的环境卫生，加强卫生管理。