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采用抗生素V 号培养基测定硫酸粘菌素效价的研究



录入时间:2010-8-19 14:44:55 来源:中国医药指南

硫酸粘菌素为氨基糖苷类抗生素,是多粘杆菌产生的由多种氨基酸和脂肪酸组成的碱性多肽类抗生素,对G-菌作用极强,临床疗效肯定。其含量测定《中国药典》规定为生物效价测定方法,使用抗生素6号培养基,pH为6.o的磷酸盐缓冲溶液为稀释液。由于所致抑菌圈直径达不到规定要求,含量测定误差大。为此,本文采用抗生素V号培养基,pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液为稀释液,得到满意的结果,是对现行《中国药典》硫酸粘菌素效价测定方法的改进。
 
1材料与方法
1.1仪器与试药
仪器:Z Y一300A型抑菌圈电脑测量分析系统;钢管放置器、恒温培养箱、双碟、钢管。
试药:硫酸粘菌素对照品、硫酸粘菌素、抗生素Ⅵ号培养基pH 7.2~7.4、抗生素V号培养基pH 7.2~7.4。
 
1.2标准品溶液的制备
精密称取硫酸粘菌素对照品适量,加pH7.0的磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释成每1m L含2 000u的溶液;精密称取硫酸粘菌素对照品适量,加pH 6.0的磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释成每lml含1 000u的溶液,精密量取以上两种稀释液适量,分别用pH 7.0,6.0磷酸缓冲液制成每Im L含1600,800u的溶液
 
1.3样品溶液的制备
取本品精密称取适量两份,分别用pH 7.0,6.0磷酸缓冲液制成每l m L含2 000 U 的溶液,摇匀,静置。精密量取上清液适量,分别用pH 7.0,6.0磷酸缓冲液制成每l ml含1600,800 u的溶液。
 
1.4抗生素微生物检定法
将上述稀释液分别加至摊布大肠杆菌的抗生素Ⅵ号培养基pH7.2、抗生索V 号培养基pH7.2的菌液的双碟中,(36士1)℃培养18- 24h。
 
2结果
两种不同pH 值缓冲液所致的抑菌圈结果见表1。
 
表1 抑菌圈结果对照
培养基
缓冲剂
抑菌圈(mm)
VI
6.0
边沿不清晰,直径11-15
V
7.0
边沿清晰,直径17-23
 
 
用大肠杆菌pH 7.0磷酸盐缓冲液对8批硫酸粘菌素进行效价测定(n=5).可靠性测验结果表明,回归非常显著( P>0.01),偏离平行不显著(P>0.05).实验结果成立.6批硫酸粘菌素用《中国药典》方法测定和用改进的方法测定效价结果见表2.
 
表2两种方法测定效价结果
批号
VI培养基(pH7.0缓冲液)
V培养基(pH6.0缓冲液)
效价(%)
可信限率(%)
效价(%)
可信限率(%)
070910
101.6
4.6
99.3
4.6
070911
100.2
3.4
99.6
3.9
070912
99.4
4.1
98.2
5.1
070913
103.2
3.5
101.0
5.2
070914
99.7
5.5
100.3
4.6
070915
103.1
4.9
99.2
5.1
070916
103.0
4.8
99.3
5.2
070917
102.1
5.0
99.8
5.3
 
 
将两组效价测定结果进行统计学处理,P>0.05,实验没有显著差异.
 
3讨论
3.1本研究表明硫酸粘菌素生物效价测定,采用大肠杆菌为实验用菌,抗生素V 号培养基( pH 7.2—7.4)。磷酸盐缓冲液pH 6.0为稀释液。其抑菌圈清晰,直径大小符合《中国药典》要求。效价测定结果准确.
3.2统计结果表明两种方法进行的效价测定结果无显著差异,可性限率符合《中国药典》规定.因此,笔者认为抗生素v号培养基( pH 7.2—7.4)可以代替抗生素Ⅵ号培养基进行试验,是对现行《中国药典》硫酸粘菌素效价测定方法的改进。

 

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