[用途]

用于弧菌属的鉴定

[配法]O／129  50mg溶于50ml无水乙醇中，取1ml加入100 片直径6mm的无菌滤纸片中，吸收后于37℃ 烘干备用。每片滤纸含O / 129 10μg。

[用法]

将待检菌的肉汤涂布于碱性琼脂平板，取O / 129 纸片贴于平板上，35 ℃ 培养18-24h 。平板出现抑菌圈为阳性，无抑菌圈为阴性。

[质量控制]

创伤弧菌阳性；亲水气单胞菌阴性

7.pH9.6 肉汤培养基

［用途］

用于鉴定链球菌

[配法]

pH9.6 的肉汤100ml ，葡萄糖2g / L。

将普通肉汤调整pH9.6 ，加入葡萄糖溶解后，分装试管，每管2-3ml，121 ℃ 灭菌15min ，备用。

[用法]

将待检菌接种培养基，置35 ℃ 培养18-24h 。培养基有混浊物为阳性。

[质量控制]

粪肠球菌ATCC 29212 阳性；化脓性链球菌ATCC 10389 阴性

［保存］

4 ℃ 冰箱保存，2 周内用完。

8.氰化钾试验培养基

[用途]

主要用于属间的鉴别，生长有：弗氏枸椽酸杆菌、克雷伯菌肠杆菌菌群、铜绿假单胞菌；不生长：沙门菌-亚利桑那菌群、大肠埃希菌、粪产碱杆菌。

[配法]

蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.225g，磷酸氢二钠4.5g，蒸馏水1L。

将上述成分加热溶解在三角烧瓶中，121 ℃ 灭菌15min ，临用时加入50g / L 氰化钾溶液1.5ml混匀，分装于无菌试管中，一份不加氰化钾作对照。

[用法]

取纯培养物接种两管，1 支氰化钾实验管，1 支对照管，置35 ℃ 培养24-72h 。阳性结果为实验管混浊，对照管混浊；阴性结果（敏感）为实验管清晰（不生长），对照管混浊性（生长）。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC27853生长；福氏志贺菌不生长。

[保存] 置冰箱内，1 周用完。

注：

（1）氰化钾抑菌能力与接种菌量及培养基成分有很大关系，所以在试验时接种菌量不宜过多。

（2）氰化钾剧毒，使用时注意安全。氰化钾培养基废弃前（无论是否用过），应作无害化处理：向每管加400 g / L 氢氧化钾溶液0.1ml和米粒大的硫酸亚铁结晶。

9 葡萄糖蛋白胨水培养基

[用途]

（1）    帮助肠杆菌属与大肠埃希菌属，葡萄球菌属与微球菌属的属间鉴别；

(2 )帮助肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌间的菌种鉴别；

(3）帮助蜂房哈夫尼亚菌与小肠结肠炎耶尔森菌的菌种鉴定。

(4）用于VP 试验。

[配法]

多价蛋白胨7g ，葡萄糖5g，磷酸氢二钾5g，蒸馏水1L。

将上述成分混合溶解后，调pH 至7.2 ，分装小试管，121 ℃ 灭菌15min。

置4 ℃ 冰箱中保存备用。

[用法]

取18-24h 培养物小量接种，35 ℃ 孵育24-48h ，有时可能延长数天。有些细菌，特别是哈夫尼亚菌，在35 ℃ 孵育时VP 试验结果不稳定，但在25-30 ℃ 下则呈阳性。若环疑为哈夫尼亚菌时，可重复VP 试验并在25 ℃ 孵育。

观察方法：

(1)奥梅拉（O-Meara）法

试剂：氢氧化钾40g 、肌酐0.3g、蒸馏水100ml。

首先将氢氧化钾溶解。然后加肌酐保存3-4 周。观察时按培养基试剂10 : 1 比例滴加试剂，混合，置37℃ 4h 或48 ℃ 2h ，充分振摇，变红色为阳性。

( 2 ）贝立脱（Barritt）法

试剂甲液：60g / L 甲-萘酚乙醇溶液；乙液：400g / L 氢氧化钾溶液。

观察时按每2 ml培养物加甲液1ml，乙液0.4ml混合，置35 ℃ 15-30min出现红色为阳性，若无红色，应置35 ℃ 4h 后再判定，本法较奥氏法敏感。

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阴性；阴沟肠杆菌阳性。

[保存]

培养基置4 ℃ 冰箱，2 周内用完。试剂易失效，应用前应进行质量控制。

注：

（1）加入O-Meara试剂后要充分混合，促使乙酰甲基甲醇氧化，使反应易于进行。

（2）试剂必须用已知阳性和阴性的标准菌株进行对照检查

（3）试剂中加入400g / L 氢氧化钾是为了吸收二氧化碳。加入量少于0.2 ml，且次序不能颠倒。

（4）贝立脱方法是相当敏感的，它可检出以前认为VP 试验阴性的某些细菌。

（5）许多实验室工作人员有一个错误的印象，即VP 试验阳性菌MR 试验自然是阴性，或反之亦然。实际上肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应（由于乙酰甲基甲醇形成碱性增加导致MR 阴性和VP 阳性）。某些细菌如蜂房哈夫尼亚菌（哈夫尼肠杆菌37℃ 下孵育和奇异变形杆菌可产生MR 和VP 同时阳性反应，后者常延迟出现。

（6）α-萘酚乙醇溶液易失效，试剂放室温暗处可保存1 月。氢氧化钾溶液可长期保存。国内多采用贝立脱法。

10 甲基红试验培养基

[用途]

检查细菌发酵葡萄糖产酸的能力；用于鉴别某些细菌，如大肠埃希菌（阳性）、产气杆菌（阴性）、阴沟杆菌（阴性），克雷伯菌属一般为阴性，耶尔森菌属阳性，其它革兰阴性非肠道杆菌阴性，单核李斯特菌阳性。

[配法]

(1)葡萄糖蛋白陈水培养基（见前）。

(2)试剂：甲基红0.1g , 95 ％乙醇300ml，蒸馏水200 ml

［质量控制］

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性；产气肠杆菌阴性

注：

(1)试剂和培养基在应用前要用已知阳性菌（如大肠埃希菌）和已知阴性菌（如克雷伯菌）做对照试验

(2)MR 试验的正确性取决于足够的孵育时间，接种细菌后至少要孵育24h 。通常每毫升培养物滴加1 滴指示剂。

[保存］

置4 ℃ 冰箱，培养基2 周内用完。甲基红试剂置密闭的棕色瓶内，可使用3 月。

11. 蛋白胨水培养基

[用途］

用于细菌靛基质试验。

[配法]

蛋白胨（或胰蛋白胨）20g ，氯化钠5g，蒸馏水1L。

将上述成分溶于水中，校正pH 至7.2 ，分装试管，每管2-3 ml，置121 ℃ 灭菌15min 备用。

附：试剂配制

（1）    靛基质柯氏试剂：对二甲氨基苯甲醛5g溶于异戊醇75ml中，待冷却后慢慢加入浓盐酸25 ml

（2）    欧氏试剂：对二甲氨基苯甲醛1g 溶于95%乙醇95ml中，溶解后慢慢加入浓盐酸20ml

（3）    色氨酸滴板法试剂：L-色氨酸0.1 只溶于100ml（pH6.8 ) 0.01mol／L 磷酸盐缓冲液中。

［用法］

将待检菌接种培养基，经35 ℃ 培养18-24h ，在培养物液面，徐徐加入靛基质试剂数滴，阳性者立即出现玫瑰红色，阴性者呈黄色

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性；肺炎克雷伯菌 阴性

［保存］

置4 ℃ 冰箱，使用期2 周

注：

(1)靛基质试验方法还有试纸悬挂法，色氨酸滴板法及斑点法，请参阅有关资料

(2）选用的蛋白陈一定要含有丰富的色氨酸，否则不能应用

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