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其它生化试验培养基 (下)



录入时间:2010-8-18 10:48:34 来源:青岛海博

6. O129 试验纸片   

[用途]

用于弧菌属的鉴定

[配法]O129  50mg溶于50ml无水乙醇中,取1ml加入100 片直径6mm的无菌滤纸片中,吸收后于37 烘干备用。每片滤纸含O / 129 10μg。

[用法]

将待检菌的肉汤涂布于碱性琼脂平板,取O / 129 纸片贴于平板上,35 培养18-24h 。平板出现抑菌圈为阳性,无抑菌圈为阴性。

[质量控制]

创伤弧菌阳性;亲水气单胞菌阴性

7.pH9.6 肉汤培养基

[用途]

用于鉴定链球菌

[配法]

pH9.6 的肉汤100ml ,葡萄糖2g / L。

将普通肉汤调整pH9.6 ,加入葡萄糖溶解后,分装试管,每管2-3ml,121 灭菌15min ,备用。

[用法]

将待检菌接种培养基,置35 培养18-24h 。培养基有混浊物为阳性。

[质量控制]

粪肠球菌ATCC 29212 阳性;化脓性链球菌ATCC 10389 阴性

[保存]

4 冰箱保存,2 周内用完。

8.氰化钾试验培养基

[用途]

主要用于属间的鉴别,生长有:弗氏枸椽酸杆菌、克雷伯菌肠杆菌菌群、铜绿假单胞菌;不生长:沙门菌-亚利桑那菌群、大肠埃希菌、粪产碱杆菌。

[配法]

蛋白胨10g,氯化钠5g,磷酸二氢钾0.225g,磷酸氢二钠4.5g,蒸馏水1L。

将上述成分加热溶解在三角烧瓶中,121 灭菌15min ,临用时加入50g / L 氰化钾溶液1.5ml混匀,分装于无菌试管中,一份不加氰化钾作对照。

[用法]

取纯培养物接种两管,1 支氰化钾实验管,1 支对照管,置35 培养24-72h 。阳性结果为实验管混浊,对照管混浊;阴性结果(敏感)为实验管清晰(不生长),对照管混浊性(生长)。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC27853生长;福氏志贺菌不生长。

[保存] 置冰箱内,1 周用完。

注:

1)氰化钾抑菌能力与接种菌量及培养基成分有很大关系,所以在试验时接种菌量不宜过多。

2)氰化钾剧毒,使用时注意安全。氰化钾培养基废弃前(无论是否用过),应作无害化处理:向每管加400 g / L 氢氧化钾溶液0.1ml和米粒大的硫酸亚铁结晶。

9 葡萄糖蛋白胨水培养基

[用途]

(1)    帮助肠杆菌属与大肠埃希菌属,葡萄球菌属与微球菌属的属间鉴别;

(2 )帮助肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌间的菌种鉴别;

(3)帮助蜂房哈夫尼亚菌与小肠结肠炎耶尔森菌的菌种鉴定。

(4)用于VP 试验。

[配法]

多价蛋白胨7g ,葡萄糖5g,磷酸氢二钾5g,蒸馏水1L。

将上述成分混合溶解后,调pH 7.2 ,分装小试管,121 灭菌15min。

4 冰箱中保存备用。

[用法]

18-24h 培养物小量接种,35 孵育24-48h ,有时可能延长数天。有些细菌,特别是哈夫尼亚菌,在35 孵育时VP 试验结果不稳定,但在25-30 下则呈阳性。若环疑为哈夫尼亚菌时,可重复VP 试验并在25 孵育。

观察方法:

(1)奥梅拉(O-Meara)法

试剂:氢氧化钾40g 、肌酐0.3g、蒸馏水100ml。

首先将氢氧化钾溶解。然后加肌酐保存3-4 周。观察时按培养基试剂10 : 1 比例滴加试剂,混合,置37 4h 48 2h ,充分振摇,变红色为阳性。

( 2 )贝立脱(Barritt)法

试剂甲液:60g / L -萘酚乙醇溶液;乙液:400g / L 氢氧化钾溶液。

观察时按每2 ml培养物加甲液1ml,乙液0.4ml混合,置35 15-30min出现红色为阳性,若无红色,应置35 4h 后再判定,本法较奥氏法敏感。

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阴性;阴沟肠杆菌阳性。

[保存]

培养基置4 冰箱,2 周内用完。试剂易失效,应用前应进行质量控制。

注:

1)加入O-Meara试剂后要充分混合,促使乙酰甲基甲醇氧化,使反应易于进行。

2)试剂必须用已知阳性和阴性的标准菌株进行对照检查

3)试剂中加入400g / L 氢氧化钾是为了吸收二氧化碳。加入量少于0.2 ml,且次序不能颠倒。

4)贝立脱方法是相当敏感的,它可检出以前认为VP 试验阴性的某些细菌。

5)许多实验室工作人员有一个错误的印象,即VP 试验阳性菌MR 试验自然是阴性,或反之亦然。实际上肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应(由于乙酰甲基甲醇形成碱性增加导致MR 阴性和VP 阳性)。某些细菌如蜂房哈夫尼亚菌(哈夫尼肠杆菌37 下孵育和奇异变形杆菌可产生MR VP 同时阳性反应,后者常延迟出现。

6)α-萘酚乙醇溶液易失效,试剂放室温暗处可保存1 月。氢氧化钾溶液可长期保存。国内多采用贝立脱法。

10 甲基红试验培养基

[用途]

检查细菌发酵葡萄糖产酸的能力;用于鉴别某些细菌,如大肠埃希菌(阳性)、产气杆菌(阴性)、阴沟杆菌(阴性),克雷伯菌属一般为阴性,耶尔森菌属阳性,其它革兰阴性非肠道杆菌阴性,单核李斯特菌阳性。

[配法]

(1)葡萄糖蛋白陈水培养基(见前)。

(2)试剂:甲基红0.1g , 95 %乙醇300ml,蒸馏水200 ml

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性;产气肠杆菌阴性

注:

(1)试剂和培养基在应用前要用已知阳性菌(如大肠埃希菌)和已知阴性菌(如克雷伯菌)做对照试验

(2)MR 试验的正确性取决于足够的孵育时间,接种细菌后至少要孵育24h 。通常每毫升培养物滴加1 滴指示剂。

[保存]

4 冰箱,培养基2 周内用完。甲基红试剂置密闭的棕色瓶内,可使用3 月。

11. 蛋白胨水培养基

[用途]

用于细菌靛基质试验。

[配法]

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g ,氯化钠5g,蒸馏水1L。

将上述成分溶于水中,校正pH 7.2 ,分装试管,每管2-3 ml,置121 灭菌15min 备用。

附:试剂配制

(1)    靛基质柯氏试剂:对二甲氨基苯甲醛5g溶于异戊醇75ml中,待冷却后慢慢加入浓盐酸25 ml

(2)    欧氏试剂:对二甲氨基苯甲醛1g 溶于95%乙醇95ml中,溶解后慢慢加入浓盐酸20ml

(3)    色氨酸滴板法试剂:L-色氨酸0.1 只溶于100mlpH6.8 ) 0.01molL 磷酸盐缓冲液中。

[用法]

将待检菌接种培养基,经35 培养18-24h ,在培养物液面,徐徐加入靛基质试剂数滴,阳性者立即出现玫瑰红色,阴性者呈黄色

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性;肺炎克雷伯菌 阴性

[保存]

4 冰箱,使用期2

注:

(1)靛基质试验方法还有试纸悬挂法,色氨酸滴板法及斑点法,请参阅有关资料

(2)选用的蛋白陈一定要含有丰富的色氨酸,否则不能应用

(3)国内多采用柯氏试剂。

 

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