［用途］
肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，如铜绿假单胞菌能还原硝酸盐并可产生氮气等，而有些细菌则无此特性，故可以此鉴别。

[配法]

蛋白胨10g ，硝酸钾（分析纯）2g ，蒸馏水1L 。

上述成分混合后，加热溶解，校正pH 至7.4 。分装试管每管约4ml，121 ℃ 灭菌15min 后备用。

附：试剂配制

甲液：对氨基苯磺酸0.8g , 5mol／L 冰醋酸100ml。

乙液：α-萘胺0.5g，5mol／L 冰醋酸溶液100ml

[用法]

将试验菌接种培养基，经35 ℃ 培养1-4 天，每天吸取培养液1ml，加入液甲、乙试剂各2 滴，阳性者立刻或数秒钟内显红棕色，阴性则不变色。

[质量控制]

大肠埃希茵ATCC 25922 阳性；硝酸盐阴性不动杆菌ATCC 15O38阴性。

注：

（1）因亚硝酸盐在自然界中分布很广，制备此培养基时所用器皿均要清洗干净

（2）硝酸盐试验很敏感，未接种的硝酸盐培养基应以试剂进行检查，确定培养基中是否存在亚硝酸盐，从而排除假阳性结果。

（3）本试验在判定结果时，必须在加试剂后立即观察，否则可因培养液迅速褪色而影响判定。

（4）沙门菌属、假单胞菌属的某些菌株，不但能还原硝酸盐为亚硝酸盐，而且还能使亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮导致假阴性结果。

（5）若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否被还原。可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色证明产生芳基肼，表示硝酸盐仍然存在；如仍不产生红色，表示硝酸盐已被还原为氨和氮。亦可在培养基内加1 只小倒管，若有气泡产生，表示有氮气生成。可以排除假阴性。

2 亚硝酸盐还原试验培养基

［用途］

测定细菌还原亚硝酸盐的能力。

[配方]

蛋白胨10g ，亚硝酸钾2g ，酵母浸膏3g ，蒸馏水1L 。

将上述成分混合后，加热溶解，调pH 至7.0。分装试管每管约4 ml，加入小倒管1 只，121 ℃ 灭菌15min 后备用。

[用法]

将试验菌接种于亚硝酸盐培养基中，35 ℃ 培养24-48h 。24h 观察倒管中有无气泡出现，若有气泡则为阳性，无气泡为阴性。48h 培养物检测亚硝酸盐存在与否。方法是在培养物内加入硝酸盐还原试剂甲、乙液各0.5ml，如无红色出现为阳性，说明亚硝酸盐已被还原；反之为阴性，说明培养基中尚有亚硝酸盐存在。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC 27853 阳性；

硝酸盐阴性不动杆菌ATCC 15038阴性

[注意事项]

（1）因亚硝酸盐在自然界中分布很广，故在制备此培养基时所用器皿均要清洗干净。

（2）未接种的亚硝酸盐培养基应以硝酸盐试剂进行检查，出现红色反应方可使用

3.40 ％胆汁肉汤培养基

[用途]

用于链球菌属的鉴别

[配法]

蛋白胨10g ，氯化钠5g，牛肉浸膏5g，新鲜胆汁（猪、牛）400ml，蒸馏水600ml。

先将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠加热溶于蒸馏水中，调pH 至7.6 ，加入胆汁混匀后，分装试管，每管3ml置115℃ 灭菌20min ，冷藏备用。取新鲜猪（牛）胆若干只，取胆汁用沙布过滤，装于瓶中115 ℃ 灭菌20min ，冷却后置4 ℃ 冰箱内，次日取出吸取上清液备用。

[用法]

取待检标本接种肉汤，置35 ℃ 培养24-48h ，观察有无细菌生长。阳性菌呈颗粒状生长，上液澄清，管底有沉淀；阴性菌则不生长。

[质量控制]

粪肠球菌ATCC 29212 阳性；化脓链球菌ATCC 19615 阴性

注：若为初次观察或培养基本身不易观察，可转种血琼脂平板。

4 CAMP 试验培养基

［用途］

检查细菌产生和合成CAMP 因子的能力

[配法]

同血琼脂平板

[用法］在血琼脂平板上，先以金黄色葡萄球菌划一横线接种，再将被检的B群链球菌与上述划线作垂直划线接种，两者不能相交，相距0.5-1.0cm，于35 ℃ 培养18-24h 。在两种细菌划线之交接处出现箭头形透明溶血区为阳性；无箭头状溶血区为阴性。

[质量控制]

无乳链球菌ATCC 13813 阳性；粪肠球菌ATCC 29212 阴性。

注：

( l ) CAMP 为Christic , Atkins , Much-Petersen 四人名。

( 2 ）每批要用A 、D 群链球菌作阴性对照，用B 群链球菌作阳性对照
( 3 ）用无菌9g / L 氯化钠溶液洗涤3 次的羊红细胞，制成5%含量的羊血琼脂平板效果较好。

( 4 ）用葡萄球菌β-溶血素滤液做成纸条进行试验效果亦较佳。

4 硫化氢试验培养基

［用途］

观察细菌产生硫化氢的作用

检测硫化氢产物有很多方法，以醋酸铅法最为敏感。其适用于肠杆菌科以外的细菌所产生的少量硫化氢的检测；而硫酸亚铁法，为检查硫化氢的常规培养基。现将两培养基分述如下：

（1）    醋酸铅培养基

[配法]

蛋白胨10g ，胱氨酸0.1g ，硫酸钠0.1g，蒸馏水1L

将上述成分加热溶解，调整pH 为7.0-7.4 ，分装试管，每管液体高度为4 -5cm , 115℃ 灭菌20min 。将滤纸剪成0.1-1.0cm 宽的纸条，用50-100g/L 醋酸铅溶液浸透、烘干，置于皿内备用。

[用法]

将培养物接种上述培养基中，挂上纸条经35 ℃ 孵育24h 。纸条变黑为阳性，无变化为阴性。

(1)硫酸亚铁琼脂

[配法]

牛肉膏3g ，酵母浸膏3g ，蛋白胨10g ，硫酸亚铁0.2g ，氯化钠5g，硫代硫酸钠0.3g ，琼脂12g ，蒸馏水1L 。

将上述成分加热溶解，分装试管，每管3ml，115℃ 灭菌20min ，备用。

[用法]

将试验菌株穿刺接种到培养基中，经35 ℃ 培养24h 后，观察结果。培养基呈黑色为阳性，不变黑色为阴性。

[质量控制]

鼠伤寒沙门菌ATCC 13311 阳性；宋内志贺菌ATCC 11060阴性

[保存]

置4 ℃ 冰箱，2 周内用完

5 奥普托欣敏感试验纸片（Optochin sensitivity test）

[用途]

测定细菌对化学药品奥普托欣敏感性。

[配法］

奥普托欣（Optochin ，乙基氢化羟基奎宁，ethylhydrocupreine hydrochloride ) 10mg 溶于10ml 蒸馏水中取1ml，加入200 片直径6mm的灭菌纸片中，使其充分吸收，于37℃ 烘干备用。每片含Optochin 5μg 或将宽8mm的滤纸条浸于1 : 4 000 的Optochin 水溶液中，取出烘干备用。

[用法]

将被检菌的肉汤培养物用无菌棉棒均匀涂布于血琼脂平板上，取Optochin 纸片贴于平板上，35-37℃ 培养18-24h 。抑菌圈在18mm以上为敏感，无抑菌圈或抑菌圈＜10mm为耐药。

[质量控制]

肺炎链球菌（ATCC 10015）阳性；化脓性链球菌（ATCC 19615）阴性。

注：如果分离物生长稀少，则很难正确判定结果。其判定敏感的最低标准为抑菌环直径15-16mm或更大；若＜15mm，应加做胆汁溶解试验来确定。

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