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其它生化试验培养基 (上)



录入时间:2010-8-18 10:46:03 来源:青岛海博

1 硝酸盐还原试验培养基

[用途]
肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐,如铜绿假单胞菌能还原硝酸盐并可产生氮气等,而有些细菌则无此特性,故可以此鉴别。

[配法]

蛋白胨10g ,硝酸钾(分析纯)2g ,蒸馏水1L 。

上述成分混合后,加热溶解,校正pH 7.4 。分装试管每管约4ml,121 灭菌15min 后备用。

附:试剂配制

甲液:对氨基苯磺酸0.8g , 5molL 冰醋酸100ml。

乙液:α-萘胺0.5g,5molL 冰醋酸溶液100ml

[用法]

将试验菌接种培养基,经35 培养1-4 天,每天吸取培养液1ml,加入液甲、乙试剂各2 滴,阳性者立刻或数秒钟内显红棕色,阴性则不变色。

[质量控制]

大肠埃希茵ATCC 25922 阳性;硝酸盐阴性不动杆菌ATCC 15O38阴性。

注:

1)因亚硝酸盐在自然界中分布很广,制备此培养基时所用器皿均要清洗干净

2)硝酸盐试验很敏感,未接种的硝酸盐培养基应以试剂进行检查,确定培养基中是否存在亚硝酸盐,从而排除假阳性结果。

3)本试验在判定结果时,必须在加试剂后立即观察,否则可因培养液迅速褪色而影响判定。

4)沙门菌属、假单胞菌属的某些菌株,不但能还原硝酸盐为亚硝酸盐,而且还能使亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮导致假阴性结果。

5)若加入硝酸盐试剂不出现红色,需检查硝酸盐是否被还原。可于原试管内再加入少许锌粉,如出现红色证明产生芳基肼,表示硝酸盐仍然存在;如仍不产生红色,表示硝酸盐已被还原为氨和氮。亦可在培养基内加1 只小倒管,若有气泡产生,表示有氮气生成。可以排除假阴性。

2 亚硝酸盐还原试验培养基

[用途]

测定细菌还原亚硝酸盐的能力。

[配方]

蛋白胨10g ,亚硝酸钾2g ,酵母浸膏3g ,蒸馏水1L 。

将上述成分混合后,加热溶解,调pH 7.0。分装试管每管约4 ml,加入小倒管1 只,121 灭菌15min 后备用。

[用法]

将试验菌接种于亚硝酸盐培养基中,35 培养24-48h 。24h 观察倒管中有无气泡出现,若有气泡则为阳性,无气泡为阴性。48h 培养物检测亚硝酸盐存在与否。方法是在培养物内加入硝酸盐还原试剂甲、乙液各0.5ml,如无红色出现为阳性,说明亚硝酸盐已被还原;反之为阴性,说明培养基中尚有亚硝酸盐存在。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC 27853 阳性;

硝酸盐阴性不动杆菌ATCC 15038阴性

[注意事项]

1)因亚硝酸盐在自然界中分布很广,故在制备此培养基时所用器皿均要清洗干净。

2)未接种的亚硝酸盐培养基应以硝酸盐试剂进行检查,出现红色反应方可使用

3.40 %胆汁肉汤培养基

[用途]

用于链球菌属的鉴别

[配法]

蛋白胨10g ,氯化钠5g,牛肉浸膏5g,新鲜胆汁(猪、牛)400ml,蒸馏水600ml。

先将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠加热溶于蒸馏水中,调pH 7.6 ,加入胆汁混匀后,分装试管,每管3ml115 灭菌20min ,冷藏备用。取新鲜猪(牛)胆若干只,取胆汁用沙布过滤,装于瓶中115 灭菌20min ,冷却后置4 冰箱内,次日取出吸取上清液备用。

[用法]

取待检标本接种肉汤,置35 培养24-48h ,观察有无细菌生长。阳性菌呈颗粒状生长,上液澄清,管底有沉淀;阴性菌则不生长。

[质量控制]

粪肠球菌ATCC 29212 阳性;化脓链球菌ATCC 19615 阴性

注:若为初次观察或培养基本身不易观察,可转种血琼脂平板。

4 CAMP 试验培养基

[用途]

检查细菌产生和合成CAMP 因子的能力

[配法]

同血琼脂平板

[用法]在血琼脂平板上,先以金黄色葡萄球菌划一横线接种,再将被检的B群链球菌与上述划线作垂直划线接种,两者不能相交,相距0.5-1.0cm,于35 培养18-24h 。在两种细菌划线之交接处出现箭头形透明溶血区为阳性;无箭头状溶血区为阴性。

[质量控制]

无乳链球菌ATCC 13813 阳性;粪肠球菌ATCC 29212 阴性。

注:

( l ) CAMP Christic , Atkins , Much-Petersen 四人名。

( 2 )每批要用A 、D 群链球菌作阴性对照,用B 群链球菌作阳性对照
( 3
)用无菌9g / L 氯化钠溶液洗涤3 次的羊红细胞,制成5%含量的羊血琼脂平板效果较好。

( 4 )用葡萄球菌β-溶血素滤液做成纸条进行试验效果亦较佳。

4 硫化氢试验培养基

[用途]

观察细菌产生硫化氢的作用

检测硫化氢产物有很多方法,以醋酸铅法最为敏感。其适用于肠杆菌科以外的细菌所产生的少量硫化氢的检测;而硫酸亚铁法,为检查硫化氢的常规培养基。现将两培养基分述如下:

(1)    醋酸铅培养基

[配法]

蛋白胨10g ,胱氨酸0.1g ,硫酸钠0.1g,蒸馏水1L

将上述成分加热溶解,调整pH 7.0-7.4 ,分装试管,每管液体高度为4 -5cm , 115 灭菌20min 。将滤纸剪成0.1-1.0cm 宽的纸条,用50-100g/L 醋酸铅溶液浸透、烘干,置于皿内备用。

 

[用法]

将培养物接种上述培养基中,挂上纸条经35 孵育24h 。纸条变黑为阳性,无变化为阴性。

(1)硫酸亚铁琼脂

[配法]

牛肉膏3g ,酵母浸膏3g ,蛋白胨10g ,硫酸亚铁0.2g ,氯化钠5g,硫代硫酸钠0.3g ,琼脂12g ,蒸馏水1L 。

将上述成分加热溶解,分装试管,每管3ml,115 灭菌20min ,备用。

[用法]

将试验菌株穿刺接种到培养基中,经35 培养24h 后,观察结果。培养基呈黑色为阳性,不变黑色为阴性。

[质量控制]

鼠伤寒沙门菌ATCC 13311 阳性;宋内志贺菌ATCC 11060阴性

[保存]

4 冰箱,2 周内用完

5 奥普托欣敏感试验纸片(Optochin sensitivity test

[用途]

测定细菌对化学药品奥普托欣敏感性。

[配法]

奥普托欣(Optochin ,乙基氢化羟基奎宁,ethylhydrocupreine hydrochloride ) 10mg 溶于10ml 蒸馏水中取1ml,加入200 片直径6mm的灭菌纸片中,使其充分吸收,于37 烘干备用。每片含Optochin 5μg 或将宽8mm的滤纸条浸于1 : 4 000 Optochin 水溶液中,取出烘干备用。

[用法]

将被检菌的肉汤培养物用无菌棉棒均匀涂布于血琼脂平板上,取Optochin 纸片贴于平板上,35-37 培养18-24h 。抑菌圈在18mm以上为敏感,无抑菌圈或抑菌圈<10mm为耐药。

[质量控制]

肺炎链球菌(ATCC 10015)阳性;化脓性链球菌(ATCC 19615)阴性。

注:如果分离物生长稀少,则很难正确判定结果。其判定敏感的最低标准为抑菌环直径15-16mm或更大;若<15mm,应加做胆汁溶解试验来确定。

 

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