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碳源和氮源利用试验培养基



录入时间:2010-8-18 10:44:17 来源:青岛海博

1 粘液酸利用试验培养基

[用途]

用于无动力不产气不发酵乳糖的大肠埃希菌与志贺菌属的鉴别。前者多数为阳性,后者均为阴性

[配法]

蛋白胨10g ,粘液酸10g,蒸馏水1L , 2g / L 溴麝香草酚蓝溶液12ml

将上述成分混合溶解,校正pH 7.4 。分装试管,每管约3-4ml ,经121 灭菌15min , 4 冷存备用

[用法]

取试验菌株18-24h 肉汤培养物1 环接种培养基。35 孵育1-2 周,每天观察结果。培养基呈黄色为阳性表明细菌能利用粘液酸盐;若培养基不变色则为阴性

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 阳性;痢疾志贺I ATCC 13313阴性

2 丙二酸盐试验培养基

[用途]

主要用于下述菌属的鉴定:阳性菌有粪产碱杆菌、亚利桑那菌、克雷伯菌;阴性菌有不动杆菌属、沙门菌属、放线菌属;特别是枸椽酸杆菌,用于属内种的鉴定如弗劳地、异型枸椽酸杆菌呈阳性,而丙二酸盐阴性构椽酸杆菌呈阴性。

[配法]

酵母浸膏1g ,硫酸铵2g ,磷酸氢二钾0.6g,磷酸二氢钾0.4g,氯化钠2g ,丙二酸钠3g ,葡萄糖0.25g, 溴麝香草酚蓝0.025g,蒸馏水1L

将上述成分溶解后调pH 6.7,分装小试管,每管3ml,121 灭菌15min,冷却后置冰箱保存。

取纯培养物接种培养基中,35 孵育24-48h 。培养基由绿色变蓝色为阳性,培养基为绿色或黄色(仅葡萄糖发酵产酸)为阴性。应观察48h 方可报告。

[质量控制]

肺炎克雷伯菌ATCC 27236阳性;丙二酸盐阴性杆菌阴性。

[保存]

4 冰箱,1 周内用完。

3 醋酸盐试验培养基

[用途]

用于肠杆菌科的鉴定

[配法]

醋酸盐2g ,氯化钠5g,硫酸镁2g/ L ,磷酸氢铵1g ,磷酸氢二钾1g ,琼脂20g,蒸馏水1L

 将上述成分加热溶解,校正pH 6.8,然后加2g / L 溴麝香草酚蓝溶液12 ml,121 灭菌15min ,制成斜面备用

[用法]

将试验菌接种到斜面上,35 培养7d ,每天观察1 次。培养基由绿色变为蓝色为阳性

[质量控制]

大肠埃希菌(ATCC 25922 )阳性;宋内氏志贺菌(ATCC 11060)阴性。

[保存]

4 冰箱,2 周内用完

注:

(1)试验菌株要新鲜。

(2)   阴性菌要观察至第7天,方可报告。

4 葡萄糖酸盐试验培养基

[用途]

帮助属间鉴别、种间鉴别和沙雷菌属菌种的鉴定。

[配法]

蛋白胨1.5g,磷酸氢二钾1g ,酵母浸膏1g ,葡萄糖酸钾40g ,或葡萄糖酸钠37.25g,蒸馏水1L。

将上述成分加热溶解,调pH 7.0 ,然后分装试管,每管2ml,115 灭菌15min ,冷却备用。取待检菌大量接种培养基,35 培养24-48h ,加斑氏试剂1ml,充分混匀,隔水加热煮沸10min ,观察结果。产生黄-橙色沉淀为阳性,蓝色沉淀为阴性
[
质量控制]

肺炎克雷伯菌ATCC 27236阳性;大肠埃希菌ATCC 25922 阴性。

5 枸椽酸盐试验培养基

[用途]

鉴定细菌对枸椽酸盐及无机铵的利用能力。

[配法1 ( Simmons ) ]

硫酸镁0.2g ,磷酸二氢铵1g ,磷酸氢二钾1g ,枸椽酸钠5g,琼脂20g ,氯化钠5g,2g / L 溴麝香草酚蓝溶液40ml ,蒸馏水1L ( pH 6.8 )。

[配法2 ( Christensen ) ]

枸椽酸钠3g ,葡萄糖0.2g ,酵母浸膏0.5g,盐酸半肤氨酸0.1g ,枸椽酸铁铵0.4g ,磷酸氢二钾1g ,硫代硫酸钠0.08g ,氯化钠5g,酚红0.012g ,琼脂5g,蒸馏水1LpH6.9 )

先将盐类溶解于水内,调整pH ,再加入琼脂,加热溶化后,加入指示剂,混合均匀后分装试管,高压灭菌121 15min ,放成斜面。将待检菌浓密地划线接种在上述斜面上,于35 培养1-4 天,逐日观察结果。

Simmons(西蒙)枸椽酸盐培养基斜面上有细菌生长,培养基由绿变成蓝色为阳性,无细菌生长,颜色不变蓝色为阴性;Christinsen (柯氏)枸椽酸盐培养基斜面呈红色为阳性,颜色不变为阴性。

[保存]

4 冰箱,2 周内用完

[质量控制]

肺炎克雷伯菌阳性;大肠埃希菌ATCC 25922 阴性

注:

1)当挑取同一培养物接种一组生化试验管时,在接种枸椽酸盐培养基前,接种针或环要用火焰灭菌,或先接种枸椽酸盐培养基。因培养基上若存在葡萄糖或其它营养物质可导致假阳性。

2)接种时菌量应适宜,过少可导致假阴性结果,接种物过量可导致假阳性结果。

3)通常培养24h 观察结果,但有些枸椽酸盐阳性的细菌则需孵育48h 以上,才能使培养基的pH 变化。

6 碳源利用试验培养基

[用途]

测定细菌利用碳源的能力

[配法]

磷酸氢二铵0.5g,磷酸二氢钾1.3g ,磷酸氢二钠3.2g,硫酸钠0.8g ,硝酸钠1g ,待测物质2-10g,蒸馏水1L 。

将各成分溶于水中,校正pH 7.2 ,分装,116 灭菌15min。

[用法]

将待试菌制成低浓度的9g / L 氯化钠溶液菌悬液,接种培养基,于适当的温度下培养24-48h 。若有细菌生长即为阳性,反之为阴性。

[质量控制]

菌液不可太浓,否则结果不易观察。应设已知菌阴性、阳性对照。可用多种细菌试验同一含碳化合物,亦可用多种含碳化合物试验同一种细菌。

注:

(1)    使用的含碳化合物主要为各种糖类和有机酸类

2)不能用一支培养管做多项试验

 

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