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生化试验培养基——酶类测定培养基和试剂(上)



录入时间:2010-8-17 16:29:51 来源:青岛海博

1 氨基酸脱羧酶试验培养基

[用途] 检查细菌使氨基酸脱梭基形成胺使培养基变碱的能力。常用的氨基酸有赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸。

[配法]

蛋白胨5g ,牛肉浸膏5g,溴甲酚紫0.1g ,甲酚红0.005g,吡多醛(VB6 0.005g,葡萄糖0.5g,蒸馏水1L。

 加热慢慢溶解,按10g / L 浓度加入所需要的氨基酸,调pH 6.0 ,呈深亮紫色。分装每支2ml,同时配对照管(不加氨基酸),高压灭菌121 15min ,冷却后4 冷藏备用。

[用法]

将试验菌接种培养基,同时接种对照管1 支。并用灭菌的液体石蜡覆盖,置35 培养18-24h 。阳性菌初期由于细菌发酵葡萄糖产酸呈黄色,若继续孵育,氨基酸经脱梭产生胺类使培养基变碱,指示剂改变颜色,呈紫色或紫红色。阴性呈黄色或不变色

[质量控制]

赖氨酸脱羧酶:迟缓爱德华菌阳性,弗劳地枸椽酸菌阴性;鸟氨酸脱羧酶:产气肠杆菌阳性,弗劳地枸椽酸菌阴性;精氨酸脱羧酶:鼠伤寒沙门菌阳性,普通变形杆菌阴性。

2 耐热DNA 酶培养基

[用途]

用于检测细菌所产生的耐热脱氧核糖核酸酶。

[配法]

胰蛋白胨1.5g,植物蛋白胨0.5g,氯化钠0.5g,DNA 2g / L ,琼脂1.5g,蒸馏水100ml,2g/ L 甲苯胺蓝溶液0.25ml。

将前6 种成分徐徐加热溶解后,调pH 7.4 ,加入甲苯胺蓝溶液,分装试管,121 灭菌15min 后备用。

[用法]

上述琼脂倾注于载玻片上,凝固后,打孔,孔径2cm,孔内加入经100 15min隔水加热处理后的肉汤培养物。将载玻片孵育于35 湿盒内4h ,取出观察结果。阳性反应在孔周围出现不小于4mm直径粉红色圈,阴性反应培养基的颜色无改变。

[质量控制]

金黄色葡萄球ATCC 25923 阳性;表皮葡萄球菌ATCC 12990 阴性。

3 DNA 酶试验培养基

[用途]

供细菌DNA 酶测定用。

[ 配法]

DNA 2g,胰酪胨15g,大豆胨5g,氯化钠5g,琼脂20g ,蒸馏水1L。

5 种成分混合于蒸馏水中,加热溶解,校正pH 7.2-7.4 ,分装三角烧瓶,经115 灭菌15min,倾注灭菌平皿,4 冷藏备用。

[用法]

将待检菌作点状穿种在平板上,置35 培养24h 。待细菌生长成集落菌苔后,在其菌苔上及周围滴加0.1molL 盐酸溶液数毫升,待片刻后,如待检菌DNA 酶阳性,可在菌苔的周围出现明显的透明圈;而阴性者则无透明圈出现。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌ATCC 25923 和粘质沙雷菌ATCC 274 阳性;表皮葡萄球菌ATCC 14990 和大肠埃希菌ATCC 25922 阴性。

[保存] 4 冰箱1 周内用完。

4 氧化酶试验
[用途]

区别假单胞菌与氧化酶阴性的肠杆菌科细菌。

[配法]

盐酸二甲基对苯二胺(或四甲基对苯二胺)0.1g 加蒸馏水10ml。

[用法]

取白色洁净滤纸一角,沾取试验菌落少许,加试剂一滴。阳性者立即显粉红色,并于5-10s 内呈现深紫色反应。若用四甲基对苯二胺则阳性为蓝色。

[质量控制]

铜绿假单胞菌ATCC 27853 阳性;大肠埃希菌ATCC 25922 阴性。

[保存]

置棕色瓶内可用一周,4 冰箱保存,或分装于棕色瓶内密封。

5 尿素酶试验培养基

[用途]

用于细菌尿素酶测定

[配法]

蛋白胨1g,葡萄糖1g ,氯化钠5g,磷酸二氢钾2g , 4g / L 酚红溶液3ml,琼脂18-20g, 200L 尿素溶液100ml,蒸馏水1L 。

将前5 种成分混合于蒸馏水中,加热溶解,校正pH 7.0 ,然后加入酚红溶液,分装每瓶100ml,经121 灭菌15min备用。临用时,加热溶解,冷却至55 左右,加入无菌的尿素溶液10ml,摇匀立即无菌分装于灭菌试管,每支2 ml,并置成斜面。经无菌试验后备用。

[用法]

取培养物接种斜面,35 孵育24h 。尿素酶阳性者斜面变红色,阴性者颜色无变化。

[质量控制]

普通变形杆菌ATCC 13315 8h )整个培养基变红、肺炎克雷伯菌ATCC 27236仅斜面变红(24h ) ;大肠埃希菌ATCC 25922 为阴性(24h )。
[
保存]

4 冰箱,2 周内用完

6 磷酸酶试验培养基

[用途]

测定细菌产生磷酸酶的能力。用于区别葡萄球菌有无致病性,致病性葡萄球菌呈阳性。还有助于克雷伯菌属与肠杆菌属的鉴定。

[配法]

含磷酸酚酞的营养琼脂培养基

将上述琼脂加热溶化,待冷却至45 时,加入滤过除菌的10g / L 磷酸酚酞溶液1 ml,摇匀后倾注平板。

[用法]

接种待测菌株,35 培养18-24h 。在平皿盖上滴加浓氨水1 滴,熏蒸片刻。如有酚酞释出,菌落即变为粉红色为阳性;不变色为阴性。

注:

1)亦可用液体法进行试验:经培养后在培养基内滴加氢氧化钠溶液,观察结果,显红色为阳性。

2)以上为酸性磷酸酶的试验方法。如果作碱性磷酸酶试验,可将磷酸对硝基酚加入pH 10.5 、0.04molL 的甘氨酸氢氧化钠缓冲液内。观察结果时不必另行加碱。

3)酚酞指示剂产生的颜色随其pH 而变化,试剂的量要准确,太少或太多的碱均可引起假阳性或假阴性结果。

 

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