1 军团菌培养基
缓冲活性炭酵母琼脂培养基(BCYE )
[用途]
用于嗜肺军团菌的分离培养
[配法]
酵母浸液10g ,活性(NoritSG ) 2g , L-半胱氨酸盐酸盐0.4g ,可溶性焦磷酸铁盐0.25g,琼脂17g , N-2- 乙酰氨基-乙氨基乙醇磺酸(ACES ) 10g,蒸馏水80ml。
上述成分除半肤氨酸及焦磷酸铁外,其余成分混合加热溶解,经121 ℃ 15min灭菌,放水浴中冷却到50 ℃ 。另外分别配新鲜L- 半胱氨酸溶液(10ml蒸馏水中含0.4g)及焦磷酸铁溶液(10ml含0.25g ) ,分别过滤除菌,再加入已灭菌琼脂中,加入1mol/L 氢氧化钾溶液4-5ml使培养基的最终pH 为6.9 -7.0 ,可用1mol/L 盐酸溶液校正,倾注平板,冷却后置4 ℃ 冰箱备用,亦可制成斜面,用于保存菌种。该培养基为黑色。
[用法]
液体标本可直接接种培养基,肺、肝、脾等固体标本须制成100g / L 悬液后再接种培养基,接种后的培养基置35 ℃ 需氧环境培养,培养箱需保持一定的湿度。每天用解剖镜检查平板培养物,用略大于100 角的斜射光源照明。在BCYE 平板上,培养4-5 天,菌落直径约1-2mm,并出现亮蓝和切削玻璃样的构造;继续培养后菌落增大呈黄绿色,较光滑。
[保存]
在室温、暗室中可保存1 周
2 弯曲菌选择性培养基
( l ) Skirrow 's 培养基
[用途]
用于空弯及幽门螺杆菌分离培养
[配法]
蛋白胨5g,胰蛋白胨5g,酵母膏5g,氯化钠5g,琼脂粉12g ,万古霉素10ml ,多粘菌素B 2500U , TMP5mg脱纤维羊血70ml ,蒸馏水930mL
除血和抗生素外,其余成分混合于水中,加热溶解,调pH 至7.2 , 121 ℃ 灭菌15min 待冷至50℃ 时加入羊血7ml和多抗液0.5ml,摇匀,倾注无菌平板。
[用法]
将标本接种平板,置25 ℃ 或43 ℃ 微需氧环境中培养48h ,菌落直径达1-2mm ,为不溶血的菌落
[质量控制]
大肠埃希菌ATCC 25922和粪肠球菌ATCC 33186 不生长;空肠弯曲菌胎儿亚种ATCC 29424 生长良好。
注:
l )多抗液的配制:① 乳酸62mg (约2 滴)加入100ml 灭菌水中,然后加入TMP100mg ,混合加热100 ℃ 灭菌。② 取① 液5ml ,再加万古霉素100mg 和多粘菌素B 0.38mg ,摇匀后即可
2 )弯曲菌属系微需氧菌,培养时可提供5 %氧气及10 %二氧化碳。高浓度氧不利于细菌生长,尤其是幽门螺杆菌。因此标本采集后,应尽决接种培养,或置运送培养基中运送
3 )弯曲菌运送可用布氏菌汤培养基
( 2 ) Campy -BAP 培养基
[用途]
用于分离培养弯曲菌。
[配法]
蛋白胨10g ,胰胨10g ,葡萄糖10g ,酵母浸膏3g ,氯化钠5g,重亚硫酸钠0.1g ,蒸馏水900ml ,脱纤维羊血100ml ,万古霉素10mg ,多粘菌素B 2500U, TMP 5mg ,两性霉素B 2mg
将上述成分(除羊血和抗菌补充剂外),加入900ml 蒸馏水,加热溶解,调pH 至7.2 后分装,121 ℃ 灭菌15min ,加入羊血和抗菌药物添加剂,充分混匀后倾注于无菌平皿内。
[用法]
取标本接种于平板,置25 ℃ 或43 ℃ 微需氧环境中培养48h ,菌落直径达1-2 mm ,不溶血
[质量控制]
大肠埃希菌ATCC 25922 不生长;粪肠球菌ATCC 33186 不生长;空肠弯曲菌胎儿亚种ATCC 29424 生长良好
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