附 录 B
液体石蜡保藏法
B.1 适用范围
本方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌(如芽孢杆菌属，醋酸杆菌属等)和某些丝状真菌(如青霉属，曲霉属等)。
B.2 原理
液体石蜡保藏法可作为定期移植保藏法的辅助方法。在液体石蜡覆盖下，菌种的生物代谢受到抑制，细胞老化被推迟。此方法可阻止氧气进入，使好气菌不能继续生长，也可防止因培养基的水分蒸发而引起的菌体死亡，达到延长菌种保藏时间的目的。
B.3 技术要求
B.3.1 菌种培养参照附录A
B.3.2 应选用优质化学纯液体石蜡。
B.3.3 液体石蜡易燃，在对液体石蜡保藏菌种进行操作时注意防止火灾。
B.3.4 保藏场所应保持干燥，防止棉塞污染。
B.3.5 保藏期间应定期检查，如培养基露出液面，应及时补充灭菌的液体石蜡。
B.4 方法与步骤
B.4.1 液体石蜡
将液体石蜡分装加棉塞，用牛皮纸包好，0.1MPa灭菌30分钟取出，置40℃恒温箱蒸发水分，经无菌检查后备用。
B.4.2 斜面培养物的制备
参照附录A，斜面宜短，不超过试管三分之一为宜。
B.4.3 灌注石蜡
无菌条件下将灭菌的液体石蜡注入刚培养好的斜面培养物上，液面高出斜面顶部1厘米左右，使菌体与空气隔绝。
B.4.4 保藏
将注入石蜡油的菌种斜面直立存放于低温(4℃-15℃)干燥处，保藏时间为2-10年不等。
B.4.5 恢复培养
恢复培养时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。
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