第三章  培养基的制备

 

目前培养基的配制主要分为干粉培养基和新鲜培养基两类。干粉培养基是将培养基原材料浓缩，喷雾干燥，然后根据要求将干粉原料按一定配比制成各种不同的培养基。干粉培养基在使用时，只需按说明书称重，加入蒸馏水、分装、高压灭菌后即可使用。南于它具有使用方便、易于保存、质量稳定等优点，所以深受各微生物实验室的欢迎。

 

第一节  培养基的制备方法

一、新鲜培养基的制备

    不同类型培养基制备的程序不尽相同。但配制一般培养基的主要程序为：调配、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、高压灭菌及检定等步骤。

  1．调配

  按培养基处方准确称取各种成分，混悬于蒸馏水或去离子水中。

  2．溶化

  将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，特别是含有琼脂成分的更应注意防止烧焦和外溢。溶化完毕，应注意补足失去的水分。

    制备大量培养基时，除中性硬质玻璃容器外，还可以用不锈钢锅、搪瓷桶等容器加热溶解，但不可用铜或铁锅，以免金属离子进入培养基中，影响培养基酸碱度，最终影响细菌的生长。

    3．矫正pH

    pH比色计应准确可靠，一般培养基需矫正pH至7.4~7.6，此外亦有需要酸性或碱性的培养基。培养基在高压灭菌后会有所变化，一般来说，用氢氧化钠调节时，灭菌后会下降0.1~0.2；用碳酸氢钠调节时，灭菌后会上升0.1左右。故矫正应掌握这种变化规律。

    4．分装

    根据需要将培养基分装于不同的三角烧瓶、试管等。分装的量不宜超过容器的2／3以免灭菌时外溢。

    (1)基础培养基。应常贮有无菌的基础培养基，以便临时分装或配制鉴别培养基等。分装的量根据使用目的和要求决定，但必须定量分装，便于应用。一般分装于三角烧瓶或盐水瓶内，高压灭菌后备用。

    (2)琼脂斜面。分装量为试管容量的1/5，灭菌后需趁热放置成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3。

   (3)半固体培养基。分装量约为试管的1/3，高压灭菌后直立凝固备用。

    (4)高层琼脂。分装量约为试管长度的1/3，高压火菌后趁热直立，待冷后凝固备用。

    (5)琼脂平板。将高压灭菌（或加热融化）后的培养基，冷至50℃左右，以无菌手续倾入灭菌平皿中，内径90mm的平皿注培养基约15-20ml，轻摇平皿底部，等凝固后即成。倾注培养基时切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。

    新制成的平皿培养基（简称平皿），表面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣置于37℃培养箱内30分钟，待平皿表面干燥后使用。

    5．高压灭菌

    不同成分、性质的培养基，可采用不同的灭菌方法。高压蒸汽灭菌法是其中一种，高压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别，  一般培养基121℃高压灭菌30分钟即可，含糖的培养基116℃高压灭菌15分钟，以免糖类被破坏。

    6．检定

    每批培养基制成后必须检定，将培养墓37摄氏度放置24小时，证明无菌，同时用已知菌种检查细菌生长情况，符合要求方可使用。每批应注明制作日期、批号。无菌试验培养基应在一周内使用。硫乙醇酸盐培养基超过一周时，应水浴加热驱氧后再使用。制好的培养基不宜保存过久，以少量勤做为宜。宜保存在4℃冰箱内，也可室温保存，效期为2-3周。

二、干粉培养基的制备

    从20世纪80年代开始，我国培养基主要原材料迅速发展，并逐步商品化，这为我国干粉培养基生产奠定了良好的基础。特别是自20世纪90年代以来，我国商品干粉培养基生产蓬勃发展，如雨后春笋。其生产方法主要采用球磨混匀法，因为此方法生产设备及生产工艺较为简单，便于操作，产品损耗少，又可大批量生产，故生产成本较低，具有投资少收益大等优点。其生产方法简述如下：首先选择适宜的培养基原材料，经检定合格后方可投产，即按照培养基处方成分比例加到含有不锈钢或陶瓷球的球磨罐中，球磨一定时间后倒出，取小样进行检定，合格后分装于合适的容器中，贴上标签（应注明产品名称、使用说明、批号、有效期、生产厂家等项日），方可销售。

    干粉培养基使用时只需按标签上的说明称量、加水、分装、高压灭菌。不需调节pH。