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微生物培养基质控与图解——培养基的制备



录入时间:2010-8-5 17:07:41 来源:青岛海博

第三章  培养基的制备
 
目前培养基的配制主要分为干粉培养基和新鲜培养基两类。干粉培养基是将培养基原材料浓缩,喷雾干燥,然后根据要求将干粉原料按一定配比制成各种不同的培养基。干粉培养基在使用时,只需按说明书称重,加入蒸馏水、分装、高压灭菌后即可使用。南于它具有使用方便、易于保存、质量稳定等优点,所以深受各微生物实验室的欢迎。
 
第一节  培养基的制备方法
一、新鲜培养基的制备
    不同类型培养基制备的程序不尽相同。但配制一般培养基的主要程序为:调配、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、高压灭菌及检定等步骤。
  1.调配
  按培养基处方准确称取各种成分,混悬于蒸馏水或去离子水中。
  2.溶化
  将各种成分混匀于水中,最好以流通蒸气溶化半小时,如在电炉上溶化应随时搅拌,特别是含有琼脂成分的更应注意防止烧焦和外溢。溶化完毕,应注意补足失去的水分。
    制备大量培养基时,除中性硬质玻璃容器外,还可以用不锈钢锅、搪瓷桶等容器加热溶解,但不可用铜或铁锅,以免金属离子进入培养基中,影响培养基酸碱度,最终影响细菌的生长。
    3.矫正pH
    pH比色计应准确可靠,一般培养基需矫正pH至7.4~7.6,此外亦有需要酸性或碱性的培养基。培养基在高压灭菌后会有所变化,一般来说,用氢氧化钠调节时,灭菌后会下降0.1~0.2;用碳酸氢钠调节时,灭菌后会上升0.1左右。故矫正应掌握这种变化规律。
    4.分装
    根据需要将培养基分装于不同的三角烧瓶、试管等。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。
    (1)基础培养基。应常贮有无菌的基础培养基,以便临时分装或配制鉴别培养基等。分装的量根据使用目的和要求决定,但必须定量分装,便于应用。一般分装于三角烧瓶或盐水瓶内,高压灭菌后备用。
    (2)琼脂斜面。分装量为试管容量的1/5,灭菌后需趁热放置成斜面,斜面长度约为试管长度的2/3。
   (3)半固体培养基。分装量约为试管的1/3,高压灭菌后直立凝固备用。
    (4)高层琼脂。分装量约为试管长度的1/3,高压火菌后趁热直立,待冷后凝固备用。
    (5)琼脂平板。将高压灭菌(或加热融化)后的培养基,冷至50℃左右,以无菌手续倾入灭菌平皿中,内径90mm的平皿注培养基约15-20ml,轻摇平皿底部,等凝固后即成。倾注培养基时切勿将皿盖全部启开,以免空气中尘埃及细菌落入。
    新制成的平皿培养基(简称平皿),表面水分较多,不利于细菌的分离,通常应将平皿倒扣置于37℃培养箱内30分钟,待平皿表面干燥后使用。
    5.高压灭菌
    不同成分、性质的培养基,可采用不同的灭菌方法。高压蒸汽灭菌法是其中一种,高压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别,  一般培养基121℃高压灭菌30分钟即可,含糖的培养基116℃高压灭菌15分钟,以免糖类被破坏。
    6.检定
    每批培养基制成后必须检定,将培养墓37摄氏度放置24小时,证明无菌,同时用已知菌种检查细菌生长情况,符合要求方可使用。每批应注明制作日期、批号。无菌试验培养基应在一周内使用。硫乙醇酸盐培养基超过一周时,应水浴加热驱氧后再使用。制好的培养基不宜保存过久,以少量勤做为宜。宜保存在4℃冰箱内,也可室温保存,效期为2-3周。
二、干粉培养基的制备
    从20世纪80年代开始,我国培养基主要原材料迅速发展,并逐步商品化,这为我国干粉培养基生产奠定了良好的基础。特别是自20世纪90年代以来,我国商品干粉培养基生产蓬勃发展,如雨后春笋。其生产方法主要采用球磨混匀法,因为此方法生产设备及生产工艺较为简单,便于操作,产品损耗少,又可大批量生产,故生产成本较低,具有投资少收益大等优点。其生产方法简述如下:首先选择适宜的培养基原材料,经检定合格后方可投产,即按照培养基处方成分比例加到含有不锈钢或陶瓷球的球磨罐中,球磨一定时间后倒出,取小样进行检定,合格后分装于合适的容器中,贴上标签(应注明产品名称、使用说明、批号、有效期、生产厂家等项日),方可销售。
    干粉培养基使用时只需按标签上的说明称量、加水、分装、高压灭菌。不需调节pH。

 

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