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微生物培养基质控与图解——染色液配制及染色法



录入时间:2010-8-5 15:23:20 来源:青岛海博

 1.美蓝染色法
    吕氏碱性美蓝染色液
    美蓝                  0.3g
    95%乙醇               30ml
    0.01%氢氧化钾溶液    100ml
    将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。
    染色法:将涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1-3分钟,水洗,待于,镜检。
    结果:菌体呈蓝色。
    2.革兰染色法
    结晶紫染色液
    结晶紫             lg
    95%乙醇            20ml
    1%草酸铵水溶液     80ml
    将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
    革兰碘液
    碘        lg
    碘化钾    2g
    蒸馏水    300ml
    将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300ml。
    沙黄复染色液
    沙黄       0.3g
    95%乙醇    10ml
    蒸馏水    90ml
    将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
    染色法
    将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫色液,染1分钟,水洗。
滴加革兰碘液。作用1分钟,水洗。
   滴加95%乙醇脱色,约30秒;或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10秒。水洗,滴加复染液,复染1分钟。水洗,待干,镜检。
  结果
  革兰阳性染色量很多因素的影响,与涂片厚薄、酒精脱色时间、染液储存时间、细菌生长时期等有关。
3.耐酸性染色法(萋-倪二氏法)
    石炭酸品红染色液
    碱性品红    0. 3g
   95%乙醇    l0ml
    5%酚水溶液    90ml
将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。
    3%盐酸-乙醇
    浓盐酸    3g
    95%乙醇    97ml
复染液
  吕氏碱性美蓝染色液
  染色法
  将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸汽出现,但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5分钟,倾去染液,水洗。
    滴加盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1~3分钟),水洗。
   滴加吕氏碱性美蓝染色液。复染30秒~1分钟,水洗,待干,镜检。
    结果
    耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
    4.柯氏染色法
    染色液
    0.5%沙黄液
    0.5%孔雀绿液
    染色法
    将涂片在火焰上同定,滴加0.5沙黄液,并加热至出现气泡,2-3分钟,水洗。
   滴加0.5%孔雀绿液,复染40~ 50秒,水洗,待干,镜检。
    结果
    布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色。
    5.奥尔特荚膜染色法
    染色液
    沙黄    3g
    蒸馏水    l00ml
    用乳钵研磨溶解。
    染色法
    将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸汽后,继续染3分钟。水洗,待干,镜检。
    结果
    炭疽芽胞杆菌苗体呈褐色,荚膜呈黄色。
    6.瑞氏染色法
    染色液
   瑞氏色液    0.3g
  甲醇        60ml
  用乳钵研磨溶解。
  染色法
  涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1分钟。加入等量蒸馏水( pH6.5),染色3~5分钟,用蒸馏水冲洗,待干,镜检。
    7.鞭毛染色法
    染色液的配置
    甲液:称单宁酸5g,氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100ml蒸馏水中,待溶解后加入1%的氧氧化钠溶液1ml和15%的甲醛溶液2ml。
    乙液:称2g硝酸银溶于100ml蒸馏水中,在90ml乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10ml乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2~3天基本无效。
    染色法
在风干的载玻片上滴加甲液,4~6分钟后,用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现下燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色。停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
    碱性复红染色法
    将0.5g碱性复红染料溶解于20ml 95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100ml。如有不溶物时,可用滤纸过滤或静置后取上清渡备用。
    注:本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,借以与蜡样芽胞杆菌相区别。

 

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