氰化钾(KCN)培养基
成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000ml
0.5%氰化钾溶液 20ml
pH7.6
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0ml(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
氧化酶试验
试剂:
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落,加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色,阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
硝酸盐培养基
成分:
硝酸钾 0.2g
蛋白 5g
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂:
甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
试验方法:接种后在36±1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果:硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
细胞色素氧化酶试验
试剂:
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2~3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物,如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上。
结果:于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
过氧化氢酶试验
试剂:
3%过氧化氢溶液:临用时配制。
试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2ml,观察结果。
结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。
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