1、培养：支原体的培养37℃即可，当然，初次培养37℃，5％－10％co₂效果更好。其中，解脲支原体生长比较快，用我所培养基，接种量10⁴－ 10⁵ccu，培养16－18h即可达到对数生长期。人型，肺炎，24－48h即可达到对数生长期。

2、鉴定：主要靠菌落染色、生化反应及特异性生长抑制试验等.

（1）Dienes菌落染色
　　Dienes染色液：
　　美蓝 2.5g
　　天青－Ⅱ 1.5g
　　麦芽糖 10g
　　碳酸钠 0.5g
　　蒸馏水 100ml

染色时，直接吸染色液覆盖菌落，1min后，用生理盐水洗去染色液，低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色，而其他菌菌落不着色。

（2）生化反应

根据不同采样部位及对底物的分解或者作为能源，可以鉴别不同支原体。

解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH₃使培养基的ph升高，酚红指示剂变红。

人型支原体分解L－精氨酸不分解尿素，生成NH₃使PH值升高，酚红指示剂变红。

肺炎和人型支原体分解葡萄糖，使pH降低，酚红指示剂由红变黄。

（3）在含0.002%美蓝的培养基中肺炎支原体能生长且将美蓝还原而退色，其他口腔、唾液或发酵支原体均被抑制生长，此法可鉴定肺炎支原体。

（4）分子生物学鉴定

由于支原体的基因文库已建立，通过pcr扩增和基因探针技术可以对支原体进行鉴定。

如果要自己配制培养基，现提供几种配方：

基础培养基：Hayflick培养基（PPLO培养基），牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 加14g琼脂粉为固体培养基

（1） 肺炎支原体培养基

基础培养基 70ml
　　牛血清 （灭活） 20ml
　　25％的酵母浸液 10ml
　　50％葡萄糖 1－2ml 0.4
　　酚红 0.5ml
　　制霉素 0.001g
　　青霉素 10万IU
　　pH 7.8

（2）人型支原体培养基

基础培养基 70ml
　　马血清 20ml 25％的酵母浸液 10ml
　　30％L－精氨酸 0.33ml
　　0.4％酚红 0.5ml
　　制霉素 0.001g
　　青霉素 10万IU
　　pH 6.3

（3）解脲支原体培养基

基础培养基 70ml
　　马血清 20ml
　　25％的酵母浸液 10ml
　　30％尿素0.33ml
　　0.4％酚红 0.5ml
　　制霉素 0.001g
　　青霉素 10万IU
　　pH 6.0

注：由于支原体能在人工培养基上生长，但是营养要求较高，需要提供胆 固醇和酵母才能生长。以上配方中，马（牛).血清提供胆固醇，酵母浸液提供酵母。